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琥珀酸脱氢酶(SDH)测试盒
(50T/48 样)
一、测定原理:
琥珀酸脱氢酶(SDH)催化底物反应,FAD 是该
反应的辅基,FAD 被还原成 FADH,该反应与 2,6- DPIP
的还原相偶联,测定 2,6-DPIP 的还原速度可以推算出
SDH 的活力。
二、试剂组成与配制:(50T/48 样)
试剂一:液体 60mL×2 瓶,4℃冷藏 3 个月;
试剂二:液体 6mL×1 瓶,避光 4℃冷藏 3 个月;
试剂三:液体 6mL×1 瓶,避光 4℃冷藏 3 个月;
试剂四:液体 6mL×2 瓶,避光 4℃冷藏 3 个月;
试剂五:液体 6mL×1 瓶,避光-20℃冷藏 3 个月,如需分
多次使用,建议老师将试剂五分装后冷冻保存,
避免多次的反复冻融;
试剂六:液体 6mL×1 瓶,4℃冷藏 3 个月。
工作液的配制:按试剂一:试剂二:试剂三:试剂四:试剂五:试
剂六=2 : 0.1 : 0.1 : 0.2 : 0.1 : 0.1 的比例进行配
制,用多少配多少,现用现配,配好后一定要避光。
三、操作步骤:
a、将可见分光光度计于 600nm 处,1cm 光径比色皿,以双蒸
水调零 (比色皿准备两只,一只用于调零,一只用于测
定)。
b、将工作液,37℃预温 5 分钟以上。
c、往相应编号的试管中加入 100μL 待测样本,用 5mL 移
液器吸取 2.6mL 工作液迅速冲入试管中,立即混匀并
计时。
d、迅速倒入比色皿中在可见分光光度计 600nm 处比色,5
秒时读取吸光度值(A1值),在 1 分 5 秒时再次测定吸
光度值(A2 值);
e、求出 2 次吸光度差值(△A=A1-A2)。
注意点:
①、工作液一定要避光保存,测定过程中工作液同样要
避光;
②、比色皿必须用自来水冲洗干净,再用双蒸水洗 2~
3 次后,才能对下一个样本进行检测;
③、在比色皿中加完样后,下一步加试剂与按秒表需
同步;
④、在比色皿中加完试剂后,必须快速放入分光光度
计的比色槽中;
⑤、试剂二、试剂三、试剂四、试剂五必须避光冷藏;
⑥、配好的混合试剂在测定前必须预温。
琥珀酸脱氢酶(SDH)测试盒
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