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镀银染色实验代测

镀银染色实验简介：

镀银染色改良bielschowsky法。镀银染色主要染神经轴突，神经细胞内原纤维，神经原纤维缠结，老年斑呈黑色，背景金黄色。常用于研究老年性痴呆等神经细胞原纤维的病理改变，了解神经纤维有无变性，破坏的程度。

镀银染色实验步骤（仅供参考）：

1、 石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ10min-无水乙醇Ⅱ10min-95%酒精5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-蒸馏水洗。

2、 硝酸银反应：切片浸入20%硝酸银加盖于暗处反应20min。

3、 蒸馏水洗（在此期间配制银氨溶液）：染色第2步用过的20%硝酸银，逐滴加入氢氧化铵，边滴边搅拌，直到开始形成的白色沉淀又消失，银液变清即为银氨溶液。

4、 银氨液处理：切片浸入银氨液作用15min（在此期间配制稀氨水，银氨液用于下步配制显影工作液）。稀氨水配制：蒸馏水30ml加氢氧化铵3滴。

5、 稀氨水中浸泡：切片移入稀氨水中浸泡（在此期间配制显影工作液）。

显影储备液：甲醛液20ml+蒸馏水100ml+硝酸1滴+柠檬酸0.5g。

显影工作液：取第4步用过的银氨液30ml，加入显影储备液3滴，混合均匀，即配即用不能保存。

6、 显色：切片浸入显影工作液中显色，约3-7min，镜下控制显色，金黄色的背景，神经纤维呈黑色时即取出。切片浸入第5步用过的稀氨水中浸泡1min。流水冲洗1min。

7、 去除未反应的银离子：5%硫代硫酸钠处理2min（固定已反应的银盐和除去未反应的银离子）。流水冲洗5min。

8、 脱水封片：将切片依次放入95%酒精I 5min -95%酒精II 5min-无水乙醇Ⅰ5min -无水乙醇Ⅱ5min -二甲苯Ⅰ5min -二甲苯Ⅱ5min中脱水透明，将切片从二甲苯拿出来稍晾干，中性树胶封片。

9、显微镜镜检，图像采集分析。

 染色结果：神经轴突，神经细胞内原纤维，神经原纤维缠结，老年斑及树突呈黑色，背景金黄色。

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