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TTC染色实验代测

TTC染色实验介绍：

TTC（2，3，5—氯化三苯基四氮唑）是脂溶性光敏感复合物，1894年*合成用来检测种子的生存能力，1958年开始用来染色检测哺乳动物组织的缺血梗塞。它是呼吸链中吡啶—核苷结构酶系统的质子受体，与正常组织中的脱氢酶反应而呈红色，而缺血组织内脱氢酶活性下降，不能反应，故不会产生变化呈苍白

TTC染色实验步骤（仅供参考）：

1、动物麻醉后立即取材，冷冻PBS从左心室灌注，整个灌注5分钟内必须完成；

2、入-20℃冰箱中速冻20-30min，便于切片；

3、用手术刀片或是刮胡刀片切片，厚度2-3mm为宜；

4、将切片置于TTC孵育液中，放入37℃温箱（不得高于40℃）或是水浴锅中避光孵育15-30min，随时观察，间隔数分钟翻动组织，使其均匀接触到染色液；

5、组织成色后，加入固定液终止反应及保存组织，24h后拍照。

染色结果：正常组织呈红色，梗死区呈苍白色。

注意事项：

1、标本越新鲜越好，动物麻醉后取材需迅速，勿固定，刀片宜薄而锋利，在冰箱中速冻的时间以能顺利切片为宜，保持切片平整；

2、孵育液提前30min入37℃中水浴或是温箱中加温；

3、染色后的标本浸存于10%中性甲醛或是4%多聚甲醛中，染色结果能保存数月，在阳光下易褪色；

4、TTC染色液避光4℃可保存数月，可重复利用2-3次。

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