Caspase-8实验代测 返回列表页

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Caspase-8实验代测

Caspase家族活性的检测

      Caspase家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用。在正常状态下， Caspase家族都以无活性的酶原(30～50kD)形式表达，当细胞发生凋亡时Caspase可以被蛋白酶裂解，大亚基和小亚基形成活化的Caspase 。一些Caspase活化后可以次序激活其他Caspase形成Caspase级联反应，促发细胞凋亡。在目前已知的14种Caspase中，Caspase-3、8和9与凋亡的关系为密切，在细胞凋亡中起执行凋亡的作用。将Caspase序列特异性的多肽偶联至发色基团，当该底物被特定的caspase剪切后，发色基团即游离出来，可通过酶标仪或分光光度计（λ=405nm 或400nm）测定其吸光值，考察caspase的活化程度。
Caspase家族属于半胱氨酸蛋白酶，相当于线虫中的ced一3，具有高度同源性。这些蛋白酶均有以下特点：①总是在天冬氨酸之后切断底物，所以命名为caspase(cysteine aspartate—specific protease)。②酶活性依赖于半胱氨酸残基的亲核性。③通常以酶原的形式存在，为由两大、两小亚基两两组成的异四聚体。大、小亚基由同一基因编码，在受到激活后前体被切割，产生两个活性亚基。这些蛋白酶是引起细胞凋亡的关键酶，一旦信号转导途径被激活，caspase被活化，随后发生凋亡蛋白酶的级联反应。细胞内的酶被激活，可降解细胞内的重要蛋白质，终导致细胞不可逆地走向凋亡。
它们的活性位点均包含半胱氨酸残基，能够特异性的切割靶蛋白天冬氨酸残基上的肽键，故名。caspase负责选择性地切割某些蛋白质，从而造成细胞凋亡。
早发现人类中与线虫ced一3同源的基因是ICE(interleukin一1 p—convertingenzyme白介素1 p转换酶)基因，因该酶能将白介素一1前体切割为活性分子而得名。通过cDNA杂交和基因组数据库查找分析，在人类细胞中已发现11个ICE同源物，分为2个亚(subgroup)：ICE家族和CED一3家族。前者参与炎症反应，后者参与细胞凋亡。后者又分为两类：一类为执行者(executioner，effector)，如caspase一3、caspase一6、caspase一7，它们可直接降解细胞内的结构蛋白和功能蛋白，引起凋亡，但不能通过自催化(autocatalytic)或自剪接的方式激活；另一类为启动者(initiator)，如caspase一8、caspase一9，受到信号刺激能通过自剪接而激活，然后引起caspase级联反应，如caspase一8可依次激活caspase～3、caspase一6、caspase一7。启动蛋白(initiataor)和效应蛋白(effector)分别在死亡信号转导的上游和下游发挥作用。

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