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抗坏血酸过氧化物酶测试盒(APX)
(Ascorbate Peroxidase,分光光度法 50 管/48 样)
一、测定意义:
抗坏血酸过氧化物酶(Aseorbate Peroxidase,APX)是以
抗坏血酸为电子供体且专一性强的过氧化物酶,主要存在于植
物叶绿体和胞浆中,是叶绿体中清除H2O2关键酶,也是抗坏血
酸代谢的重要抗氧化酶。H2O2是植物叶绿体中光合电子传递链
和某些酶反应的天然产物,是具有毒害作用的活性氧。APX具
有多种同功酶,主要分为两大类型:一种为位于叶绿体中并分
解叶绿体中的H2O2的叶绿体型同工酶;另一种为位于叶绿体之
外的其它细胞组分(分别定位于胞质、线粒体、过氧化物和乙
醛酸体,以及过氧化体和类囊体膜上)的细胞质型同工酶。
二、测定原理:
抗坏血酸过氧化物酶(APX)催化抗坏血酸(ASA)与过
氧化氢(H2O2)反应,使ASA氧化成单脱氢抗坏血酸(MDASA)。
随着AsA被氧化,溶液中290nm波长下的吸光度值(A290)下降,
根据单位时间内A290减少值,计算抗坏血酸过氧化物酶(APX)
活性。ASA氧化量按消光系数2.8(mol/mL)/cm计算。
三、自备仪器用品:
低温离心机、紫外分光光度、1cm光径石英比色皿、移液枪、
研钵、冰和蒸馏水
五、【储存条件及有效期】
试剂于 2~8℃保存可稳定 3 个月。
六、操作步骤
1、粗酶液提取:
按组织质量(g):缓冲液体积(mL)=1:9的比例加入
试剂一(如0.1g组织加入0.9mLR1缓冲液),冰水浴匀浆,
10000rpm/min,离心10min,取上清待测。
抗坏血酸过氧化物酶测试盒(APX)
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