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精子快速染色液

(Quick Sperm Stain)

[储存条件及有效期]

本试剂盒应置室温密封保存，有效期一年。

[样本制片前处理]

涂片的制备:为达到良好染色效果，不同性状精液标本的涂片方式有所区别，可根据具体情况选择下列涂片方法。

1、低粘度精液(“拉薄"技术: 滴一小滴(5-10ul) 新鲜液化精液于清洁载玻片上，将推玻片保持与载玻片 30 度角，置于精液正前方，稍往后移与精液液滴接触，即可见精液液滴沿推片下缘散开，再匀速沿载玻片平面平稳向前滑动，制成适当厚度涂片。若精子密度>20X10°/ml，取 5ul 量精液涂片: 若精子密度<20X10°ml，取 10-20ul 量精液涂片。

2、高粘稠度精液或低精子密度或充满碎屑精液: 稀释精浆或离心去精浆。取 0.2-0.5ml 精液加 10ml 生理盐水，800g 离心 10 分钟，去掉上清液，用生理盐水调节精子密度至(40-70)X10°/m1 左右，充分混匀。再取 5-10u1 悬浮液于清洁载玻片上，将推玻片保持与载玻片 30 度角，置于精液正前方，稍往后移与精液液滴接触，即可见精液液滴沿推片下缘散开，再匀速沿载玻片平面平稳向前滑动，使此滴精液在载玻片上充分展开。然后在 10X40 倍光径下扫视载玻片，以确保精液涂片均匀: 10X40 倍镜下每视野至少有 40 个精子，并且没有精子成团或重叠。

操作步骤

1、精液悬液涂片制备完成后，水平放置，空气中自然干燥

2、用 95%乙醇固定 2~3 分钟，空气中自然晾干。 干透后水合 1~2 分钟

3、试剂一核染液染色 30 秒~2 分钟，流水洗净

4、试剂二浆染液染色 20 秒~2 分钟，不要倒丢，立即滴加增色液混合作用 5 秒左右，再用试剂三增色液冲洗一遍，滤纸吸干。

5、显微镜油镜下镜检观察。

镜检结果

1、精子顶体区染成淡紫色，顶体后区染成深紫色，精子体部及尾区染成淡红色。

2、世界卫生组织(WHO) 精子缺陷型分类如下:

3、多重精子缺陷指数的计算

WHO 推荐以下列参数评价精子形态异常: 畸形精子指数(teratozoospermia index,TZI)或多种异常指数(multiple anomalies index,MAI),即用缺陷总数除以畸形精子数目，以及用精子畸形指数(sperm deformity index,SDI)，即缺陷总数除以精子总数。这些参数预示精子在体内和体外的功能情况。

计数方法:染色标本结果观察时，分别记录“正常"、“头部缺陷"、“中段缺陷"和“尾部缺陷"精子数。如果一个精子同时有头、中段、及尾部缺陷，应同时记录这三种缺陷，这三种缺陷分别记录在相应的分类中，而这个精子只作为一个细胞数被计数。至少计数 200 个精子。

计算方法示例:

计数和精子数:200

正常精子数:78

正常精子百分比: (78/200X 100%)39%

缺陷精子数: (200-78)122 (61%)

头部缺陷精子数:110 (55%)

中段缺陷精子数:18 (9%)

尾部缺陷精子数:16 (8%)

缺陷总数: (110+18+16)144

畸形精子指数(TZI) =(缺陷总数/缺陷精子数) =144/122=1.18

精子畸形指数 (SDI) =(缺陷总数/所数精子总数)=144/200=0.72

畸形精子指数(TZI) 的数值介于 1.00 (每异常精子只有一种缺陷) 和 3.00 (每个异常精子都有头、中段和尾部缺陷) 之间。

有研究表明，TZ>1.6 与未经治疗不育夫妇的低生育率有关，而且 SDI1.6 是体外受精失败的阅值。

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