苹果酸脱氢酶（MDH）测定试剂盒 生化试剂 返回列表页

苹果酸脱氢酶（MDH）测定试剂盒

（测血清、血浆 紫外法）

二、操作步骤：

a、将紫外分光光度计于 340nm 处,0.5cm 光径石英比色皿,以双蒸水调零 (石英比色皿准备两只,一只用于调零,一只用于测定)。

b、将工作液，37℃预温 3 分钟以上。

c、往相应编号的试管中加入 100μl 待测样本，取 1ml 工作液迅速冲入试管中，立即混匀并计时。(空白管取 100μl 双蒸水,加入 1ml 工作液,其它操作与测定相同)

d、迅速倒入石英比色皿中在紫外分光光度计 340nm 处比色，20 秒时读取吸光度值（A1值）,在 1 分 20 秒时再次测定吸光度值（A2值）；

e、求出 2 次吸光度差值（△A=A1-A2）。

[注]：空白管只须做 1～2 只 (空白 OD 很稳定)

若△A 测定/分＜0.05 则需加大样本的浓度；否则影响检测结果。

若△A 测定/分＞0.3，则需将样本的浓度稀释后再测；否则影响检测结果。

请在批量检测前一定要取正常对照组样本做此样本最佳浓度的预试

四、测定原理：

苹果酸脱氢酶（Malate Dehydrogenase, MDH）催化的氧化还原反应伴随着 340nm 处吸光度的降低，通过测定每分钟吸光度的变化来计算苹果酸脱氢酶的活力。

五、测定意义：

MDH 与植物代谢的多条重要途径有密切关系，它在运转物质和能量的 Mal/OAA（苹果酸/草酰乙酸）和 Mal/Asp（苹果酸/天冬氨酸）穿梭中起重要作用；在光呼吸中，MDH 为 Gly（甘-氨酸）氧化提供 NAD +；在线粒体中，MDH还是决定 TCA(三羧酸循环)运转速度的调节酶之一；在细胞溶质中，MDH 与丙酮酸支路相联系。所以 MDH 系统不仅是研究酶区域化和酶调节的好系统，也为研究各细胞器之间的联系和许多发育问题提供了方便。

根据近几年文献报道，该酶不仅与植物病理有关，还与抗冻，抗盐有关。MDH 与抗热的关系仅见于对嗜热菌的报道。

苹果酸脱氢酶可用于继发性肝癌早期诊断与鉴别和心肌病早期诊断继发性肝癌时 MDH1、MDH2、MDH3活性均增强。

AMI 时 12～24 小时，MDH3酶带活性增强。也表明心肌细胞线粒体损伤

①、MDH 总活性升高和 MDH3增强：病毒性肝炎初期和病情极变期。幅度与病情的严重性相关，发病初期测定 MDH3意义更大。

②、MDH1和 MDH2增强：急性肝炎、肝细胞坏死。

③、MDH1、MDH2、MDH3活性均增强：肝脏肿瘤。有的肿瘤病人出现 MDH4酶带。

④、MDH3增强：急性心肌梗塞的阳性率为 91%，峰值出现时间约在 12～24 小时，是反应心肌梗塞严重性的有效指标。

附录Ⅰ:小鼠血清酶反应曲线

1、样本来源：取小鼠新鲜全血，肝素抗凝，然后置于低速离心机中，以 1000 转/分,离心 10 分钟，然后分离血浆，待测。

2、操作表：

a、将紫外分光光度计于 340nm 处,0.5cm 光径石英比色皿,以双蒸水调零 (石英比色皿准备两只,一只用于调零,一只用于测定)。

b、将工作液，37℃预温 3 分钟以上。

c、往相应编号的试管中加入 100μl 待测样本，取 1ml 工作液迅速冲入试管中，立即混匀并计时。(空白管取 100μl 双蒸水,加入 1ml 工作液,其它操作与测定相同)

d、迅速倒入石英比色皿中在紫外分光光度计 340nm 处比色，20 秒时读取吸光度值（A1值）,在 1 分 20 秒时再次测定吸光度值（A2值）；

e、求出 2 次吸光度差值（△A=A1-A2）。

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