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甘油含量 (Glycerol)测定试剂盒
(适用于做组织样本)
测定原理:
在 ATP 存在下甘油被甘油激酶磷酸化为 3-磷酸甘油,再被甘油磷酸氧化酶氧化产生过氧化氢:在过氧化氢酶作用下生色底物转化为苯醒亚胺,光密度值与甘油浓度成正比。
所需设备:
酶标仪、可见光分光光度计 (721、722 型)、生化分析仪。
操作过程:
1、样本处理:详见说明书或本公司-技术文章部分关于样本处理的说明。测定组织和细胞同时需要测定蛋白浓度。可用本所的 A045-2 总蛋白定量测试盒(考马斯亮蓝法)或者 A045-3、A045-4 总蛋白定量测试盒(BCA 法)进行蛋白浓度的测定。
2、标准品稀释
用蒸馏水、生理盐水或与样品缓冲液一致的液体,将 4mM 甘油标准品倍比稀释为1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125 mol/L,通常 4~6 管即可,注意设置 0 浓度对照反应管。
计算:
1、绘制标准曲线并计算甘油浓度。Excel 作图步骤: 各标准管 OD 值为y轴,标准品浓度为x轴。 鼠标左键圈住数据,点击做图向导,选择-散点图-,点击-完成-。@ 鼠标右键点图上的某一点,点击-添加趋势线-,点击-选项-,点击-显示公式-和-R2值-。
2、以 mg 蛋白浓度或细胞数校正甘油含量。
甘油含量 (Glycerol)测定试剂盒
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