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支原体-染色液(Dienes)

产品简介：

支原体染色液(Dienes染色液)是一种经典的利用天青美蓝染色检测支原体污染的试剂，

经常用于培养的贴壁或悬浮细胞以及组织切片的细胞凋亡检测，该试剂检测细胞含量范围一

般为 0.1～1×106 之间，Dienes 染色液亦可用于泌尿生殖道感染细菌的染色鉴别。该试剂

仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

产品组成：

自备材料：

1、PBS 或生理盐水

2、载玻片、盖玻片

3、显微镜

操作步骤(仅供参考)：

(一)贴壁细胞

1、取洁净盖玻片在 70%乙醇中浸泡 5 分钟或更长时间，无菌超净台内吹干或用无菌 PBS

或生理盐水洗涤 3 次，再用细胞培养液洗涤 1 次。

2、将盖玻片置于 6 孔板或其他培养皿内，接种细胞培养过夜，使融合率约为 50%～80%。

3、加入 Dienes 染色液覆盖表面，孵育 1～2min。

4、弃染色液，PBS 或生理盐水洗 2 次，每次 3min，吸尽液体。

5、显微镜下观察。

(二)悬浮细胞

1、低速离心后吸去大部分液体保留约 50μl 液体，再缓缓悬起细胞，滴加至载玻片上，尽

量使细胞分布均匀。

2、稍晾干，使细胞贴在载玻片上不易随液体流动。

3、加入 Dienes 染色液覆盖表面，孵育 1～2min。

4、弃染色液，PBS 或生理盐水洗 2 次，每次 3min，吸尽液体。

(三)悬浮细胞

1、用棉试子在载玻片上涂一层 Dienes 染色液，待干。

2、挑取细菌，置于载玻片上。

3、覆盖玻片，密封，观察菌落形态。

(四)支原体菌落

1、将

3、加入 Dienes 染色液覆盖表面，孵育 1～2min。

4、弃染色液，PBS 或生理盐水洗 2 次，每次 3min，吸尽液体。

染色结果：

支原体菌落呈蓝色，L 型细菌菌落在短时间内呈蓝色，但 30~60min 后逐渐褪色，呈无色。

注意事项：

1、在为了获得细胞沉淀的离心的过程中，对于特殊细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当

提高离心力或延长离心时间。

2、如染色太深不宜观察，可用蒸馏水将染液稀释 50~300 倍。

3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：12 个月有效。

支原体-染色液(Dienes)