提供商
酶联(上海)生物试剂科技有限公司资料大小
106.6KB资料图片
下载次数
172次资料类型
WINRAR 压缩文档浏览次数
226次解整合素样8(ADAM8) 试剂盒以 HRP标记的链霉亲和素复合物(HRP Streptavidin Conjugate,HRP-SA)为基础,可用于检测细胞、组织解整合素样8(ADAM8)抗原。该试剂盒在所用的解整合素样、特异性强、定性定位 、背景清晰。
8(ADAM8)一抗与相应靶抗原,用生物化二抗与一抗特异性 ,zui后加 HRP-SA,形成抗原—特异一抗—*化二抗—HRP-SA复合物,显微镜下观察成像。
解整合素样8(ADAM8)试剂盒所含试剂:
试剂A 通透液:0.1% Triton-X 100 10 mL(选用)
试剂B 封闭(封闭用) 20 mL
试剂 C (*分装)已稀释的即用型解整合素样(2.5ml) 8(ADAM8)一抗
试剂D (*分装)*化IgG 1支 (浓度1.5 mg/mL,稀释 1:300~1:500)50 μL+抗体稀释液20ml
试剂E HRP-SA复合物1支(浓度1 μM,稀释 1:50~1:200)100 μL
试剂F DAB显色液 5ml
用户自备试剂:
1. 10mM TBS(pH7.2~7.4)
三
1.21g
7.6g
加蒸馏 800mL,浓盐酸调pH值至7.2~7.4,zui后定容至1000mL
TBS-T:TBS+Tween 20(0.05%体积 )
2.抗原修复液(依检测抗原不同而选择不同的修复液)
10mM pH6.0 柠檬酸
柠檬酸0.38g
柠檬酸三钠2.45g
加蒸馏 900mL,浓盐酸调pH值至6.0,zui后定容至1000mL
或:0.5M EDTA修复液(pH8.0)
EDTA·2H2O 186.1g
柠檬酸三钠2.45g
加蒸馏 700mL,用10mM NaOH调pH值至8.0,zui后定容至1000Ml
3. 10 mL
4. Tween 20 5 mL
石蜡包埋组织切片
实验步骤(建议方案):
石蜡包埋组织切片3~4μm 厚度
1.烤片: 将待做切片,于60℃恒温烤箱中至少烤1 hr; 3次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次2.脱蜡: 切片放10 min;
3. : 切片经下行酒精 ,无乙醇2 min;75%乙醇2min,自来5min,95%乙醇2次(每次2min),85%,ddH2O洗2×2min;
4.抗原修复: 根据抗体说明书*方法进行抗原修复,常采用高压、微波(温度达到98~100℃)或酶消化修复法,室温自然 ,自来2min,TBS洗涤(2×2min)5步封闭。
5.封闭: 滴加试剂B,37℃湿盒孵育30 min; ,ddH2O洗2×
1)* 注:有些抗原勿需修复,
直接进
6.加一抗:滴加用试剂C(即用型一抗),37℃湿盒孵育2 hr 或4℃过夜;
7.洗涤: TBS-T洗涤(3×5 min);
8.封闭: 滴加试剂B,37℃湿盒孵育10 min;
9.加二抗: 滴加用抗体稀释液稀释的*化二抗(试剂D),37℃湿盒中孵育
30 min;
10.洗涤: TBS-T洗涤(3×5 min);
11.封闭: 滴加试剂Tween 20,37℃湿盒孵育封闭20 min;
12.加HRP-SA: 滴加用试剂C稀释的试剂E(1:50~200,终浓度5~20 nM),37
℃湿盒中孵育30 min;
13.洗涤: TBS-T洗涤(3×5 min),TBS洗涤(2×5 min);
14.显色:应用DAB溶液(试剂F)显色;
15.复染:自来
,复染,脱 ,透明;
16.封片: 待组织标本干后,用试剂
17.观察成像: 显微镜下观察成像。 封片;
附1:
抗原修复方法常用抗原修复液:柠檬酸9.0)等等。 (0.01M pH6.0)、EDTA 抗原修复液(pH8.0 或,在组织上滴加*或*,37℃孵育。 ,将脱蜡
一、酶消化修复法切片脱蜡,TBS20~30min后TBS
二、微波抗原修复法微波盒中加切片架上,放,中档或10~15min,取出微波盒,自来,取出切片。因不同微波炉微波处理时间存在差异,须自行调整。
三、直接高压抗原修复法
取修复液于不锈钢高压锅中加热至 ,将组织切片,修复液然,盖上锅盖,待喷1.5~2.5min即可脱离热源,自,取出切片。此方法适用于较难检测或核抗原的修复。
四、隔
不锈钢高压锅中加自来腾,将切片放 盒中,,微波盒中加,待喷4~8 min即可,自然,取出切片。此方法适用于较难检测或核抗原的修复。
请输入账号
请输入密码
请输验证码
以上信息由企业自行提供,信息内容的真实性、准确性和合法性由相关企业负责,环保在线对此不承担任何保证责任。
温馨提示:为规避购买风险,建议您在购买产品前务必确认供应商资质及产品质量。