酶联(上海)生物试剂科技有限公司

ELISA检测试剂盒的实验准备概要

时间:2015-6-15阅读:210
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    因此,在使用间接法测定IgM抗体时,通常须将血清样本用抗人IgG抗体或A预处理,以去除IgG的干扰。这样不但测定较为繁琐,而且影响测定的特异性和灵敏度。目前,常用的IgM抗体检测方法为捕获法,即以抗人IgM抗体(抗人u链)作为固相抗体,当加入血清标本时,ELISA检测试剂盒其中的IgM类抗体(特异的和非特异的)即可被固相抗体捕获,再加入特异抗原,其与固相上捕获的IgM抗体结合后,加入酶标抗特异抗原的抗体,zui后加入底物显色。具体操作步骤如下:
1.首先将抗人IgMbt链抗体于碳酸盐缓冲液中40c下过夜包被聚苯乙烯等固相,形成固相抗体,洗涤去除未与固相结合或结合不紧的抗体后,用小牛血清或牛血清白蛋白等封闭,洗涤去除未结合的部分及杂质。
2.加入含待测IgM抗体的临床样本如血清等,ELISA检测试剂盒温育一定时间后洗板;此时,待测样本中的IgM抗体就会与固相上的抗P链抗体反应而吸附于固相上。
3.加入特异的抗原如HAV抗原、HBcAg等,温育一定时间后洗板;此时,特异抗原就会与固相上的特异IgM抗体发生反应。
4.加入酶标记的抗特异抗原的抗体,温育一定时间后洗板;此时,在固相上即形成相应的抗原抗体复合物。而特异IgM由于处于相应病原体的急性感染期,滴度很高,ELISA检测试剂盒一定稀释后,不会有明显影响,况且,在某些病原体如HBV的慢性感染阶段,IgM类特异抗体也能持续存在,只不过滴度要低很多。

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