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大鼠ELISA试剂盒操作要素对ELISA试剂盒的影响ELISA试剂盒测定进程:固相包被→加待测样品→温育→洗刷+加酶标物→温育→洗刷→加底物→温育一加中止液→比色→断定效果。
ELISA试剂盒操作较冗繁,在操作中应留心以下5个方面。
1. 在成批手工检测中,还应留心操作时差的影响。加样及混匀时间的差异,使抗原抗体反应和酶促反应时间不一致,对竞争法及定量检测影响很大,不留心可能会导致过错效果或定量禁绝。
2. 洗刷是ELISA试剂盒操作进程中抉择实验胜败的一个要害进程。目的是除去未结合的免疫反应物,中止抗原抗体反应,除去标本中与反应无关的成分、游离的酶标物以及反应进程中吸附于固相载体上的非特异性物质。可用洗板机洗板或手工洗板,前者洗刷质量较好,各反应孔洗刷效果均一,批内、批间差异小,手工洗板应留心操控各孔洗刷效果,差异不宜太大。
3. 跟着病况的发展或由其他要素影响,某些抗体在机体内的含量发作大幅不坚定,因而有必要对标本进行预处理。直接法测定中,标本恰当稀释还可下降非特异性反应。
4. 加样一般运用加液器,在ELISA试剂盒中一般有4次加样:加标本、加酶结合物、加底物和加中止液。加标本时有必要每份标本运用一支移液器吸嘴,避免穿插污染。加酶结合物、底物和中止液时则不需更换吸嘴。
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