(1)酶符号抗体作业浓度的挑选：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶符号抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法"(包被物、待检样品的参阅品及酶符号抗体分别为不同的稀释度)在正式试验系统里精确地滴定其作业浓度。

(2)包被抗体(或抗原)的挑选：将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时刻及其蛋白量也有必定影响,一般多选用4℃18～24小时。蛋白质包被的zui适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。挑选OD值zui大而蛋白量zui少的浓度。关于大都蛋白质来说一般为1～10μg/ml。

(3)固相载体的挑选：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可所以凹孔平板、试管、珠粒等。现在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在运用前均可进行挑选：用等量抗原包被，在同一试验条件下进行反响，观察其显色反响是否均一性，据此判明其吸附功能是否杰出。

(4)酶的底物及供氢体的挑选：对供氢体的挑选要求是价廉、安全、有明显地显色反响，而自身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌效果，应留意防护。有条件者应运用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是现在较为满足的供氢体。底物效果一段时刻后，应加入强酸或强碱以停止反响。一般底物效果时刻，以10-30分钟为宜。底物运用液必须新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。