1.细胞吸除培育瓶内旧培育液。

2.参加无菌pbs洗液（5-8mL）轻轻润湿细胞，稀释剩余的培育基，之后吸走洗液，动作要轻，不行吹打到细胞。

3.向瓶内参加含0.25%EDTA的*混合液少量，以能覆满瓶底为限。 
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4.置温箱中2~5分钟，一旦镜检发现细胞质回缩，细胞间隙增大后，细胞变圆，比较松动后，当即停止消化。

5.参加该细胞对应的培育基6mL（T25培育瓶）或12mL（T75培育瓶）停止消化。

6.用吸管经过吸取的培育基轻轻反复吹打瓶壁细胞，使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。吹打时应尽量以少的次数将细胞从壁上吹下，不仅要控制吹打的力度、次数，还要注意要将细胞尽可能吹成单个。这样既能减少死细胞，又能便于细胞再次均匀贴壁成长。

7.根据传代份额，将细胞悬液分瓶，再补充培育基后，静置于温箱培育，直止贴壁。

贴壁细胞在培育瓶长成细密单层后，持续成长的空间不足，培育基中的营养成份也耗费较多，一起代谢废物也有较多堆积，需求分瓶培育，对细胞进行传代扩增。关于贴壁不太紧的细胞如293，能够直接吹散后分瓶。而关于贴壁较紧的细胞如CHO，则需求以*消化后再吹散分瓶。

关于悬浮细胞换液时只需求补液就行。

悬浮细胞的传代则不需求用*消化，直接经过计数算好传代的份额，直接分瓶，补液。有些悬浮细胞趋于成团成长，此时细胞成长状况良好，当补液时，避免吹打。典型实例：jurkat便是成团成长。当jurkat细胞密度比较大时，可将培育瓶竖直放置2分钟左右，待大部分细胞沉下，吸走上层清液，补充等量的新鲜培育基。