当前位置:上海酶联生物研究所>>技术文章>>我司讲堂:培养细胞样品怎么处理?
酶联免疫试验简称Elisa试验,是elisa试剂盒样本前处理是酶联免疫试验中要害的一步,稍有不小心将导致试验满盘皆输,怎么安全,便利的处理样本,接下来我公司就和大家共享样本处理的办法
1. 融解RIPA裂解液,混匀。取恰当量的裂解液,在运用前数分钟内参加PMSF,使PMSF的*终浓度为1mM。
2. 对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(假如血清中的蛋白没有干扰,能够不洗)。依照6孔板每孔参加150-250微升裂解液的比例参加裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充沛触摸。一般裂解液触摸细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。
3. 充沛裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
对于安排样品:
1. 把安排剪切成细小的碎片。
2. 融解RIPA裂解液,混匀。取恰当量的裂解液,在运用前数分钟内参加PMSF,使PMSF的*终浓度为1mM。
3. 依照每20毫克安排参加150-250微升裂解液的比例参加裂解液。(假如裂解不充沛能够恰当增加更多的裂解液,假如需要高浓度的蛋白样品,能够恰当减少裂解液的用量。)
4. 用玻璃匀浆器匀浆,直至充沛裂解。
5. 充沛裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6. 假如安排样品本身非常细小,能够恰当剪切后直接参加裂解液裂解,经过激烈vortex使样品裂解充沛。然后同样离心取上清,用于后续试验。直接裂解的优点是比较便利,不必运用匀浆器,缺陷是不如运用匀浆器那样裂解得比较充沛。
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