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ELISA试剂盒操作过程中常见的问题
1.温育?
温育是ELISA测定中影响测定成败zui为关键的一个因素。ELISA作为一种固相免疫测定,抗原抗体的结合反应在固相上进行,要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原*结合,必须在一定的温度条件下反应一定的时间。
温育所需时间与温度成反比,即温度越高,则所需时间相对较短。zui为常用的温育温度有37℃和室温,其次是43℃和2~8℃。一些操作者,擅自改变说明书操作,使用自己喜欢的温育时间和温育温度,这样造成一些不必要的麻烦。因为,不同试剂盒有不同的温育时间和温育温度的选择,随意更改温育时间或者温育温度将导致试验结果出现偏差。
2.试剂盒平衡?
试剂盒中所有试剂和板条均应在试验前平衡至室温(约25℃),一般需在室温放置20~30分钟以上。平衡时间太短会造成试剂混匀不够,样品孵育时间相对缩短,ELISA反应不够充分。冬季室温低,可将试剂盒置37℃温箱20分钟。
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