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蛋白能溶于水是因为其表面有亲水性氨基酸,ELISA试剂盒在蛋白质的等电点处若溶液的离子强度特别高或者特别低,蛋白则倾向于从溶液中析出。硫 酸铵是沉淀蛋白zui常用的盐,因为它在冷的缓冲液中溶解性好,冷的缓冲液有利于保持目的蛋白的活性。硫 酸铵分馏常用作试验室蛋白纯化的*步,它可以初步粗提蛋白质,去除非蛋白成分。蛋白质在硫 酸铵沉淀中较稳定,可以短期在这种状态下保存中间产物,当前蛋白质纯化多采用这种办法进行粗分离翻。ELISA试剂盒在规模化生产上硫 酸铵沉淀方法仍存在一些问题,硫 酸铵对不锈钢器具的腐蚀性很强。其他的盐如硫 酸钠不存在这种问题,但其纯化效果不如硫 酸铵。 除了盐析外蛋白还可以用多聚物如PEG和防冻剂沉淀出来,PEG是一种惰性物质,同硫 酸铵一样对蛋白有稳定效果,ELISA试剂盒在缓慢搅拌下逐渐提高冷的蛋白溶液中的PEG浓度,蛋白沉淀可通过离心或过滤获得,蛋白可在这种状态下*保存而不损坏。蛋白沉淀对蛋白纯化来说并不是多么好的方法,因为它只能达到几倍的纯化效果,而我们在达到目的前需要上千倍的纯化。其好处是可以把蛋白从混杂有蛋白酶和其他有害杂质的培养基及细胞裂解物中解脱出来。
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