实验方法原理 凡盐析所获得的粗制蛋白质（盐析得到的IgG）中均含有硫酸铵等盐类，这类将影响以后的纯化，所以纯化前均应除去，此过程称为“脱盐"（desalthing）。脱盐常用透析法和凝胶过滤法，这两种方法各有利弊。前者的优点是透析后析品终体积较小，但所需时间较长，且盐不易除尽；凝胶过滤法则能将盐除尽，所需时间也短，但其凝胶过滤后样品体积较大。所以，要根据具体情况选择使用。前实验中样品体积较小，凝胶达滤后样品体积不会太增加，所以选用凝胶过滤法。
实验材料 Sephadex G-25葡聚糖凝胶G-25
试剂、试剂盒 磷酸盐缓冲液*碘汞蒸馏水磺基水杨酸溶液
仪器、耗材 锥形瓶量筒层析柱比色磁盘试管皮头滴管
实验步骤
一、试剂与器材
1. Sephadex G-25。
2. 0.0175 mol/L，pH6.7磷酸盐缓冲液。
3. 奈氏（Nessler）试剂：于500 ml锥形瓶内加入*150 g，碘110 g，汞150 g及蒸馏水100 ml。用力振荡7～15 min，至碘的棕色开始转变时，混合液温度升高，将此瓶浸于冷水内继续振荡，直到棕色的碘转变为带绿色的*汞液为止。将上清液倾入2000 ml量筒内，加蒸馏水至2000 ml，混匀备用。
4. 20%（W/V）磺基水杨酸溶液。
5. 1.5cm×20 cm层析柱。
6. 黑、白比色磁盘。
二、操作
1. 取层析柱1支（1.5 cm×20 cm），垂直固定在支架上，关闭下端出口。将已经溶胀好的Sephadex G-25中的水倾倒出去，加入2倍体积的0.0175 mol/L，pH6.7磷酸盐缓冲液，并搅拌成悬浮液，然后灌注入柱，打开柱的下端出口，继续加入搅匀的Sephadex G-25，使凝胶自然沉降高度到17 cm左右，关闭出口。待凝胶柱形成后，在洗脱瓶中加入0.0175 mol/L，pH6.7磷酸盐缓冲液以3倍柱体积的磷酸盐缓冲流过凝胶柱，以平衡凝胶。
2. 凝胶平衡后，用皮头滴管除去凝胶柱面的溶液，将盐析所得全部IgG样品加到凝胶柱表面，打开柱下口，控制流速让IgG样品溶液慢慢浸入凝胶内。凝胶柱面上加一层的0.0175 mol/L，pH6.7磷酸盐缓冲液，并用此缓冲液洗脱，控制流速为0.5 ml/min左右。用试管收集洗脱液，每管10滴。
3. 在开始收集洗脱液的同时检查蛋白质是否已开始流出。为此，由每支收集管中取出1滴溶液置于黑色比色磁盘中，加入1滴20%磺基水杨酸，若呈现白色絮状沉淀即证明已有蛋白质出现，直到检查不出白色沉淀时，停止收集洗脱液。
4. 由经检查含有蛋白质的每管中，取1滴溶液，放置在白色比色盘孔中，加入1滴奈氏试剂，若呈现棕黄色沉淀说明它含有硫酸铵。合并检查后不含硫酸铵的各管收集液，即为“脱盐"后的IgG。
注意：在检测时，用皮头滴管吸取管中溶液后应及时洗净，再吸取下一管，以免造成相互污染假象。
实验材料 蛋白质
试剂、试剂盒 胶母液磷酸氢氧化钠三氯乙酸磺基水杨酸冰醋酸考马斯亮蓝
仪器、耗材 高压电泳仪IEF槽离心机
实验步骤
一、样品提取
1. 1 ml 原核表达细胞液离心取沉淀。
2. 沉淀用100 μl IEF样品缓冲液裂解，离心取上清。
二、制胶
1. 安装超薄胶装置
2. 依次加入下述试剂
（1）胶母液 2 ml
（2）尿素 8 M/脱气
（3）NP-40 0.2 ml
（4）两性电解质 2 ml
（5）10%过硫酸胺 50 ul
（6）TEMED 5 ul
3. 倒胶
三、电泳
1. 预电泳胶凝固后，拆卸制胶装置，将胶连同支持膜一起置于水平电泳槽上（要求：电泳槽面板上首先被液体石蜡浸润，在凝胶支持膜与电泳槽面板间无气泡）。
2. 将分别被阴阳极缓冲液浸润的电极条置于胶面上将与阴阳电极接触的部位 ，盖上电泳槽罩子，连通电源，200 V 预电泳10 min。
3. 电泳，将薄棉纸剪成小块，轻轻置于预备点样的胶面上，取10~15 ul 样品液，点于薄棉纸上，盖上罩子，连通电源进行电泳
4. 电泳参数：200 V，30 min；400 V，30 min；800 V，4 hr。
四、染色
1. 固定，将电泳完的胶连同支持膜放置于固定液中，10 min。
2. 显色，50℃下，将胶与支持膜放置于染色液中，显色，直至条带出现。
