实验材料 真核细胞
试剂、试剂盒 CaCl2HEPES缓冲化铯PBS
仪器、耗材 培养箱锥形管离心管
实验步骤
1. 在转染前一天将细胞分入10 cm 组织培养平板中。当被转染的细胞是贴壁细胞，倍增时间为18~24 h时，一般按1：15从长满的培养皿中分细胞效果较好，转染的当天，细胞应在培养皿中很好地分散分布。在加入沉淀前2~4 h，用9 ml *培养液培养细胞。
2. 将要转染的DNA用乙醇沉淀，空气中晾干沉淀。将DNA沉淀重悬于450 μl 无菌水中，加50 μl 2.5 mol/l CaCl2。
3. 加500 μl 2×HeBS于一无菌的15 ml 锥形管中，将机械式移液器安上1 ml 吸头， 一边吹打2XHeBS，一边用巴斯德吸管逐滴加入DNA/CaCl2溶液，随即在漩涡混合器上振荡5 s，将其在室温下静置20 min 以形成沉淀。
4. 将沉淀均匀加入10 cm 平板的细胞中，轻轻晃动。
5. 在标准生长条件下培养细胞4~16 h，除去培养液，用5 ml 1×PBS洗细胞2次，加 10 ml *培养液培养细胞。
6. 对于短暂分析实验，可在既定的时刻收集细胞。对于稳定转化，让细胞生长两个倍增时间后分入培养皿中进行选择培养。
实验材料 真核细胞
试剂、试剂盒 *培养液TEBES
仪器、耗材 培养箱平板
实验步骤
1. 转染前一天接种呈指数生长的细胞，密度为5×105/10 cm 平板。加10 ml *培养液，在开始转染时细胞数应＜106/平板，以留足够供细胞扩增至少2倍的表面积。
2. 用TE缓冲液稀释质粒DNA至1 μg/μl ，4 ℃保存。
3. 将zui适量的质粒DNA与500 μl 0.25 mol/l CaCl2混合，加入500 μl 2×BBS中，混匀，室温下温育10~20 min。
4. 将磷酸钙-DNA溶液逐滴加入培养皿的细胞中，同时晃动培养皿，在35℃ 3%CO2培养箱中温育15~24min。
5. 用5 ml PBS洗细胞两次，加入10 ml *培养液。对于稳定转化，在35~37℃ 5%CO2培养箱中培养。对于短暂表达，培养细胞48~72 h。
6. 在开始选择稳定的转化细抱前按1：10至1：30分传细胞。于35~37℃培养箱中培养。
7. 将培养液换成选择培养液，或在适当的选择条件下培养细胞进行选择稳定的转化子。
