比色法
实验材料 DNA
试剂、试剂盒 磷酸酶缓冲液封阻液牛血清蛋白TENBT
仪器、耗材 离心机分光光度计摇床
实验步骤
1. 用DNA稀释缓冲液，稀释*酰化标准DNA，浓度为0、1、2、5、10和20 pg/μl。以同样稀释液处理待测DNA。
2. 对干硝酸纤维素滤膜：每个稀释度取1 μl 点膜，在80℃供干约1 h接步骤4。
3. 对于足龙膜：每个稀释度取1 μl 点膜，晾干后用紫外照射法将DNA交联至膜上。接步骤4或化学发光检测。
4. 用少量体枳AP7.5液沆膜1 min，在密封袋中（剪成合适大小），用10 ml 封阻液，37℃封闭1 h 注意排出气泡。
5. 稀释10 μl 亲和素-AP交联物至10 ml AP7.5。剪去封闭袋一角挤出封闭液，用亲和素-AP交联物代替，重新封口，在旋转平台室温揺荡10 min。
6. 从袋中取出滤膜移到一个浅盘中，用200 ml AP7.5冼2次，每次15 min。再用 200 ml AP9. 5洗1次，10 min，轻微摇荡。
7. 加入33 μl 75mg/ml 的NBT至7.5 ml AP9.5液中，混匀。再加入25 μl 50 mg/ml BCIP，混匀。
8. 在浅盘中避光温育溶液，不时观察直至发色达到满意程度为止。
9. 加TE pH8.0以终止反应，比较测定DNA样品和标准DNA的颜色强度以确定*酰化dNTP的掺入效率。如果该探计至少有一半标准品的强度，它可作为探针用于原位杂交。
化学发光法
实验材料 DNA
试剂、试剂盒 *磷酸酶
仪器、耗材 紫外灯离心机
实验步骤
1. 用夹子固定已转印的尼龙膜的边角于一小片干的吸水纸上，样品面朝上，放进温箱内12~80℃放15~30 min 或温室晾干过。
2. 将带核酸的面朝上暴露于紫外灯下，用zui适的时间交联。
3. 用*探针与膜杂交，用适当强度的洗液洗涤。
4. 杂交后、将膜置于杂交袋中。
5. 封口，在一个角留有一小孔便于加入和排出液体。
6. 加入1体积的封阻液、室温作1 min 轻微摇动、倒干溶液。
7. 加入1 mg/ml 链亲和素至1体积的封阻液至终浓度为1 μg/ml，在杂交袋中室温温育4 min，轻微摇动，倒干溶液。
8. 加入10体积诜液 I，室温洗膜4 min 轻微摇动，倒干溶液，重复1次。
9. 加入*酰化碱性磷酸酶至1体积的封阻液，室温作用4 min 轻微摇动、倒干溶液。
10. 用10体积洗液 I 洗膜2次，同步骤8。
11. 用0.5体积底物稀释液稀释化学发光底物，在杂交袋中室温作用4 min 轻微摇动，打开杂交袋，尽可能倒干溶液。
12. 压平杂交袋上的折皱，重新封口，结合核酸的一面向上，用一张X光片压好，在暗盒内曝光10~20 min。
