丰寿(上海)生物科技有限公司

通用ELISA试剂盒的原体抗体的对比

时间:2015-7-2阅读:446
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    研制的通用ELISA试剂盒为PRRSV临床血清抗体检测及流行病学调查提供了技术手段。该试剂盒对350份临床疑似血清检出率为88.6%。扩大诱导培养,收集菌体,提取包涵体,用GST-Protein Purtification Kit亲和层析纯化目的蛋白,SDS-PAGE电泳检测纯度达到90%以上,可知足诊断抗原质量要求。ELISA试剂盒批内和批间变异系数分别为3.44%~6.34%和5.04%~7.64%。优化后抗原zui适包被质量浓度为2.5mg/L;血清zui适稀释度为1∶100;对血清样本检测临界值为0.224;通用ELISA试剂盒特异性为95%,敏感性为90%;与猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒、猪乙型脑炎病毒、猪圆环病毒、猪瘟病毒等常见猪繁殖障碍病尺度阳性血清无交叉反应。

    用纯化PRRSV重组核衣壳蛋白GST-N为包被抗原,建立检测PRRSV血清的间接ELISA诊断方法,并组装ELISA试剂盒。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),与CUTOFF值比拟较,从而判断标本中牛支原体的存在与否。此外,3种试剂盒对牛传染性肋膜肺炎尺度血清(PS2)的检测结果显示HVRI通用ELISA试剂盒和Kit 1均为为阴性,Kit 2为阳性。因此,HVRI试剂盒与Kit 1更适于M.bovis检测和开展流行病学调查。用纯化的牛支原体抗体包被微孔板,制成固相抗体,可与样品中支原体相结合,经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后再与HRP标记的支原体抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经由*洗涤后加底物TMB显色。

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