ELISA试剂盒在实验条件（包括试剂）较难保证恒定的情况下，这种判断法较为合适。在得出标本（S）和阴性对照（N）的A值后，计算S/N值。也有写作P/N的，这里的P不代表阳性（positive），而是病（patient）的缩写，不应误解。为避免混淆，更宜用S/N表示。在早期的间接法ELISA试剂盒中，有些作者定出S/N为阳性标准，现多为各种测定所沿用。
ELISA试剂盒实际上每一测定系统应该用实验求出各自的S/N的阈值。更应注意的是，N所代表的阴性对照是不含受检物质的人血清。有的试剂盒中所设阴性对照为不含蛋白质或蛋白质含量较底的缓冲液，以致反应后产生的本底可能较正常人血清的本底低得多。阳性判定值（cut-off value）一般为阴性对照A值加上一个特定的常数，以此作为判断结果阳性或阴性的标准。ELISA试剂盒用此法判断结果要求实验条件十分恒定，阳性和阴性的对照品应符合一定的规格，须配用精密的仪器，并严格按规定操作。ELISA试剂盒阳性判定值公式中的常数是在这特定的系统中通过对大量标本的实验检测而得到的。