在什么情况下使用 Triton-X100?
1.Triton X-100 化学名称为聚乙二醇辛基苯基醚,是一种去污剂。在免疫组织化学(10 μm 以上厚切片) 和免疫细胞化学中一般用 Triton X-100 作为细胞通透剂,在膜上打孔。
2.其作用原理:Triton X-100 可以溶解细胞膜、细胞核膜、细胞器膜上的脂质而使抗体及大分子结构的物质进入胞浆和胞核内,故在细胞免疫组化时尤为推荐使用,这样抗体就能顺利进入胞内与相应抗原结合。
3.Triton X-100 既是一种表面活性剂,也有抗氧化作用。
封闭血清的选择原则是什么?
1.膜上或切片上有剩余的位点可以非特异性吸附抗体,造成后续结果的假阳性。
2.封闭血清一般是和二抗同一来源的,血清中动物自身的抗体,预先能和组织中有交叉反应的位点发生结合,否则在后面的步骤中如果和二抗发生结合,会造成背景。
3.也可以用小牛血清、BSA、羊血清等,但不能与一抗来源一致。
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