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TM-PEK是一种新颖的膜蛋白制备试剂盒。它是用基于化学而非去污剂的方法来抽提膜蛋白,不需要超声破碎、剧烈震荡、超速离心或高温孵育,这样,目的蛋白受损的几率就大大降低。而得到的蛋白组分适用于各种常见的蛋白分析,如活性分析、天然和变性的凝胶电泳、Western Blot、免疫沉淀和质谱等等。
膜蛋白通过许多疏水氨基酸残基锚定在膜结构里面,因而很难溶解在水性缓冲液系统中。为了制备膜蛋白样品,传统的方法是使用去污剂和表面活性剂增溶。但去污剂处理会使膜蛋白丧失其天然结构,妨碍了膜蛋白的功能研究。
TM-PEK的抽提方法也很简单,只有两步。*步,利用抽提缓冲液1来透化细胞或匀浆的组织,通过离心将可溶(胞质)组分与不可溶(膜)组分分离开。第二步,利用抽提缓冲液2A或2B将膜蛋白从脂双层中抽提出。抽提缓冲液2A与2B的区别在于主角不同,分别为TM-PEK试剂A和TM-PEK试剂B,不过Novagen并没有说明这两者的具体成分。抽提缓冲液2A非常温和,适于脆弱的蛋白复合物。相比之下,2B则更为,适用于那些难对付的跨膜蛋白,特别是有多个跨膜区的顽固分子。哪怕是有7个跨膜区的Frizzled-4蛋白也能轻松搞定。你可以通过实验摸索,根据目的蛋白的特点和下游应用来二选一。
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