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至今为止,抗原修复有许多种方法,在这些方法中,有的是根据抗体的要求来进行,有的是根据抗原的表达程度来进行,我们则对每种病例每项检测,都要求必须进行抗原修复,以达到抗原全面表达的状态。
物理化学试剂抗原修复法。
1. 真空负压抗原修复法:
① 切片脱蜡至水。
②0.3%H2O2甲醇真空负压处理5分钟。
③自来水洗,蒸馏水洗。
④0.01M柠檬酸盐缓冲液(PH6.0),真空负压干燥箱预先调至95℃,真空负压处理10分钟。
⑤待修复注降至室温的一,PBS洗3次,随后按选好的免疫组化染色方法进行染色。
2.微波辐射抗原修复法:
①切片脱蜡至水。
②0.3%H2O2甲醇处理10分钟。
③自来水洗,蒸馏水洗。
④ 0.01M柠檬酸盐缓冲液(PH6.0),于微波炉内微波辐射10分钟,如检测Er和Pr则需要20辐射分钟左右。
⑤待修复液降至室温后,PBS洗3次,随后按选好的免疫组织化学的染色方法进行染色。
3.高压抗原修复法:
①切片脱蜡至水。
②0.3%H2O2甲醇处理切片10分钟。
③自来水洗,蒸馏水洗。
④切片放入抗原修复液中,边同容器放入高压锅中加热至沸腾。盖上压力阀至喷汽后持续1-4分钟。
⑤待修复液恢复至室温后,PBS洗3次,随后按选好的免疫组织化学染色方法进行染色。
4.隔水热抗原修复法:
①切片脱蜡至水。
②0.3%H2O2甲醇处理切片10分钟。
③自来水洗,蒸馏水洗。
④切片放入0.01M柠檬酸盐缓冲液(PH0.6)中,边同容器一起放入水溶锅中加热,其间应不断用温度计测其温度,待抗原修复液的温度达到有效温度后(92℃↑)。即开始计时,持续40分钟。
⑤待抗原修复液恢复至室温后,PBS洗3次,随后按选定好的免疫组化染色方法进行染色。
5.电炉加热抗原修复法:
①切片脱蜡至水。
②0.3%H2O2甲醇处理切片10分钟。
③自来水洗,蒸馏水洗。
④ 将切片放入抗原修复液中于电炉上加热,不时用温度计测量温度,当达92℃后,即可拔离电源,当温度低于92℃时,再插上电源,如此反复持续至10分钟左右。
⑤待抗原修复液降至室温后,PBS洗3次,随后按选定的免疫组化染色方法进行染色。
对各种抗原修复方法的评价。
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