兔子肿瘤坏死因子αELISA试剂盒实验原理：

    本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中兔肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平。用纯化的兔肿瘤坏死因子α（TNF-α）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入肿瘤坏死因子α，再与 HRP 标记的羊抗兔抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的兔肿瘤坏死因子α呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中兔肿瘤坏死因子α（TNF-α）浓度。

兔子肿瘤坏死因子αELISA试剂盒操作步骤：

1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔 10孔，在*、第二孔中分别加标

准品 100μl，然后在*、第二孔中加标准品稀释液 50μl，混匀；然后从*孔、第二

孔中各取 100μl 分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液 50μl，

混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 弃掉，再各取 50μl 分别加到第五、第六孔

中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液 50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各

取 50μl 分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50μl，混

匀后从第七、第八孔中分别取 50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准

品稀释液 50μl，混匀后从第九第十孔中各取 50μl 弃掉。（稀释后各孔加样量都为 50μl，

浓度分别为 15μg/L，10μg/L ，5μg/L，2.5μg/L，1.25μg/L）。抗体

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样

品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl（样

品zui终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混

匀。

3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30分钟。

4. 配液：将 20倍浓缩洗涤液用蒸馏水 20 倍稀释后备用。

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此

重复 5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。

7. 温育：操作同 3。

8. 洗涤：操作同 5。

9. 显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

15分钟.

10. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止

液后 15分钟以内进行。抗体