冰冻切片  在原位杂交中以冰冻切片zui常用。切片时，要尽量避免RNA酶污染，操作时需戴手套，使用70％酒精擦洗工作台、切片机刀架、摇柄和载物台等手常接触的部位以及其他器械。切片厚度可根据具体情况而定。如靶组织中待测mRNA量较少，细胞所采用的原位杂交方法敏感性较低，为了能得到较多的信号，切片可厚些(约15―20~m)，反之则可薄些(约5―10~m)。粘贴切片前，载玻片要清洗干净，使其不含RNA酶，并进行硅化处理。清洗方法：先用热肥皂水刷洗，自来水清洗干净后置于清洁液中浸泡24小时，清水洗净烘干，95％乙醇中浸泡24小时后蒸馏水冲洗，150~C以上高温烘干，锡箔纸包好无尘存放。

硅化载玻片的制作步骤如下：
    (1)将清洗干净的载玻片在丙酮中浸泡5分钟进行脱脂；

    (2)再人无水乙醇浸泡5分钟，然后风干；细胞

    (3)继之浸人硅烷(silane)液数秒(配法：将4ml 3―氨基―丙基三乙氧基硅与P00ml丙酮混合即可)；

    (4)移至丙酮内5分钟；

    (5)入双蒸水5分钟；

    (6)zui后风于备用。

    由于原位杂交的实验周期长，实验程序繁杂，为了防止组织或细胞标本在杂交过程中脱落，载玻片要涂以铬矾明胶或多聚赖氨酸<分子量大于300 000)等黏附剂。