使用浓度对荧光PCR结果的影响：ELISA试剂盒
SYBR Green I 的使用浓度是影响实验成功与否的关键因素，如果SYBR Green I的浓度不饱和会使荧光信号不能反应产物量的变化。而过高浓度则会抑制PCR反应，降低PCR反应效率。通常试剂盒会有比较现成的方案。提高镁离子浓度可以降低SYBR Green I对PCR反应的抑制作用。在用SYBR Green I进行荧光PCR反应时， 镁离子浓度要比无SYBR Green I 的普通 PCR 反应要高(0.5-2mM)。
 
缺点：
然而虽然SYBR Green荧光染料可以用来监测各种双链DNA序列的扩增，灵活性高是它的优点，但是正如一个硬币有两面，通用性高就意味着专一性低，由于荧光染料可以和任何双链DNA结合，因此DNA引物二聚体(primer-dimers)或其它非特异扩增产物(spurious PCR)可以对定量结果产生干扰(导致低Ct值)，同时也降低了反应的专一性和可重复性---而这一点对于定量PCR分析十分重要。ELISA试剂盒
 
舍不得SYBR Green I的方便、通用、便宜的优点，又希望提高其专一性，许多人做了不少尝试：比如仔细的设计引物和纯化模板、比如使用能分析产物熔解曲线的软件可以解决引物二聚体的问题选择，还有就是采用严格热启动的扩增酶减少非特异扩增、采用特定的缓冲系统减少引物二聚体和错配形成、采用修饰碱基减少二级结构或者改变稳定性、在Tm值以上进行荧光测定减少引物二聚体的影响等等。提高PCR的特异性已经是老大难问题了，对于贪图方便、便宜的实验新手来说不一定能考虑周全，这也就是为什么许多希望能通过在普通PCR基础上摸索条件，自己完成定量PCR检测的研究人员发现结果不理想的主要原因之一。因此，不少生物技术公司针对荧光染料特异性缺点使出了各家的法宝，提出了有建设性和有新意的解决方案也让这个荧光检测技术继续焕发光彩。ELISA试剂盒