以上标本置4℃保存应小于1周，-20℃或-80℃均应密封保存，-20℃不应超过1个月，-80℃不应超过2个月；标本溶血会影响zui后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。对于每一项IHC/ICC研究，组织和细胞样本的制备都不可掉以轻心。为了方便孵育，整个组织必须被切成超薄（5-10 μm）的切片，或切成小块用于整体免疫组化（whole mount IHC）。对于ICC实验，在开始染色步骤之前，细胞必须附着在显微镜载玻片或盖玻片上。样本制备也与固定方法密切相关，而固定方法又会受到检测技术（荧光 vs 显色）的影响。

    在大部分情况下，某个实验变量将决定样本制备的zui合适方法。例如，浸润固定在甲醛中的组织必须石蜡包埋，并利用切片机切片。或者，为了检测磷酸化依赖的表位，组织可能需要快速冷冻，因此在醇类固定之后就需要一个低温箱来进行样本切片。

石蜡包埋的组织

    石蜡包埋为长期保存组织样本提供了选择。组织在用石蜡包埋之前必须固定。固定可通过灌注或解剖后立即浸润来实现，一般需要4-24小时。不建议固定组织24小时以上，因为固定过度可能导致抗原的遮蔽。如有必要，组织在固定后可转移至酒精中，直至包埋过程。

    因为石蜡与水是不混溶的，所以组织在加入熔化的固体石蜡前必须脱水。脱水是通过浸润在浓度递增的酒精中而实现的。这种方法逐步改变疏水性，让细胞伤害zui小化。脱水之后，组织与二甲苯共同孵育，以去除任何残留的酒精。石蜡一般加热到60?C进行包埋，随后过夜硬化。之后利用切片机用锋利的刀片将组织切成超薄的切片。切片在显微镜载玻片上干燥，并长时间室温储存。组织切片在开始IHC/ICC步骤之前必须再水化。石蜡是组织包埋的*也是zui常用的物质。不过，组织也可包埋在塑料中，凝固得更硬，并切成更薄的组织切片（1.5μm vs 5 μm）。 

冰冻组织

    冰冻组织样本的好处之一是省去了石蜡包埋组织zui初所需的固定步骤。在检测翻译后修饰如磷酸化时，快速冷冻特别有益。冰冻组织的制备可将组织浸润在液氮或异戊烷中，或埋在干冰里。对于冰冻组织，在冷冻和切片之后进行一个短时间的固定。冰冻组织切片zui常用醇类固定，这避免了修复甲醛交联所遮蔽的表位的需要。冰冻组织在低温箱中切片，切片在-80?C可储存多达1年。

    冰冻组织切片的处理时间比石蜡包埋切片要短一些。不过，冷冻对于组织的长期保存是不够的，且细胞内冰晶的形成可能会负面影响亚细胞的细节。此外，冰冻切片通常比石蜡切片厚。这可能导致较低的显微镜分辨率以及差的组织形态学图像。因为冰冻切片通常保留酶的活性，所以封闭可能影响IHC检测的内源酶的活性也是特别重要的。

细胞样本

    在开展ICC研究时，首先必须将细胞附着在固体支持物上，如显微镜载玻片或盖玻片。这对于贴壁细胞很简单，它们可直接放置在6孔或24孔板底部的无菌盖玻片上生长。将盖玻片预包被一层带电荷的聚合物（如多聚赖氨酸）和/或细胞外基质蛋白（如层粘连蛋白、纤维粘连蛋白或胶原），可增强细胞附着。染色过程的所有步骤可在微孔板内的盖玻片上开展，向每个孔中加入适当的溶液并移走溶液。悬浮细胞可通过Cytospin? 离心或与包被多聚赖氨酸的玻片孵育10分钟而附着在玻片上。