非标记抗体酶法

酶桥法

    *首先用酶免疫动物，制备效价高、特异性强的抗酶抗体；

    *以二抗作桥，将抗酶抗体联结在一抗上；

    *再将酶结合在抗酶抗体上，经显色显示抗原的分布

    -优点：任何抗体均未被酶标记。酶是通过免疫学原理与酶抗体结合的。避免了共价连接对抗体和酶活性的损害，提高了方法的敏感性，而且节省一抗的用量。但抗酶抗体不易纯化。

几点说明

    *一抗(假设来自种属A)的稀释度可大些，使抗体的两个Fab段均与组织抗原结合。

    *二抗——桥抗体(抗种属A的IgG抗体)应过量，使其Fab段一个与一抗结合，另一个则游离。

    *因抗酶抗体与一抗均系种属A IgG，具有相同的抗原性，所以桥抗体游离的Fab能与抗酶抗体结合，起桥作用，将其连接在与组织抗原结合的一抗上。

PAP法

    * 与酶桥法相似，不同的是，PAP 法将酶桥法的第 3、4 步并为1步，用PAP复合物代替。

    *PAP是离体制备的复合物( HRP--抗 HRP)。

    *显色与酶桥法相同，PAP复合物中的过氧化物酶催化底物水解，形成不溶性终产物。

PAP法评价

    *PAP法比直接法、间接法、酶桥法更敏感。特别适用于石蜡切片中微量抗原和抗原性减弱抗原的检测。

    -缺点：步骤较多，时间较长，不适用于临床常规检查。

    *由于常做石蜡切片，故可用于回顾性研究。

(二) 亲和组织化学法

    *是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础。

    *这种方法敏感性更高，有利于微量抗原(抗体)在细胞或亚细胞水平的定位。