(一)试验原理

   将葡萄糖氧化生成CO2是脂肪组织或脂肪细胞代谢葡萄糖的主要方式之一。本实验通过测定脂肪组织或脂肪细胞氧化生成CO2的量，以了解脂肪组织或细胞对葡萄糖的转化能力。

(二)材料

1．待检药物进行不同倍数稀释。

2．阳性对照药胰岛素。

3．动物雄性Wistar大鼠，按需要分为若干实验组和对照组。

4．试剂及配制

(1)温孵液：NaCl 6，19 g，NaHC03 3．36g，CaCl20．1lg，KCl 0．37 g，MgCl20.10g，溶至1000ml蒸馏水中，pH调至7．4。取上述液体100ml，加明胶20mg、D葡萄糖316mg，通95％O2和5％CO2混合气体。

(2)5 mol／L  H2S04、8 mol／L NaOH。

(3)U -14C一葡萄糖，用蒸馏水配制成148 kBq／ml。

(4)25％Triton、2，5一二苯基恶唑(2，5一diphenyl oxazolo，PPO)、1，4双(5一苯基恶唑基-2一)苯[1，4一bis一(5 phenyl oxazol一2一y1)一benzene，POPOP]甲苯闪烁液，将PPO 5．0 g、POPOP 0．5 g溶解到800ml甲苯和200mlTriton X一100的混合溶液内。

5．器材：37℃水浴箱、液闪仪、25ml烧瓶、带中心玻璃小瓶的橡皮塞。

(三)实验方法

1．制备标本雄性Wistar大鼠，分为实验组和对照组。实验组大鼠给予腹腔注射胰岛素或待测药物，对照组大鼠腹腔注射生理盐水，禁食12h后断头处死。取附睾脂肪垫远端部分100~200mg，称重后剪碎。将对照组和实验组脂肪组织分别置于对照瓶和测定管中。

2．对照管和测定管内分别加入温孵液1．9ml、组织样品100~200 mg、U一14 C一葡萄糖0．1ml及5 mol／L H2SO4 0．25ml，混匀后，37℃(2水浴振荡2h。

3．脂肪细胞对葡萄糖转化的测定与脂肪细胞对葡萄糖的转运实验类似，只是将组织样品用细胞样品(4×104／ml)1．9ml代替。

4．对照管和测定管内分别加入1．8 mol／L NaOH 0．2ml(加到烧瓶*小瓶中)；37℃ 水浴振荡2h后取出0．1ml，加到烁液瓶中；对照管和测定管内分别加入20g Triton闪烁液10ml；放置过夜，用液闪仪计数。

(四)结果与分析

1．计算出脂肪组织转化葡萄糖的能力。

2．计算出脂肪细胞氧化葡萄糖的能力 由测定管计数值减去对照管计数值和已知的U一14 C一葡萄糖的比活性计算氧化为14 C02的U一14 C一葡萄糖的量(μmol)，脂肪细胞氧化葡萄糖的能力以下式表示。