胶原酶

1．用灭菌的*或剪刀将组织切成3-4mm大小碎块。用Hanks*（HBSS）将组织碎块清洗数次。

2．加入胶原酶（50-200单位/ml胶原酶HBSS）。

3．在37℃ 下孵育4-18小时。加入3mM CaCl2 可以提高解离效率。

4．用灭菌的不锈钢网或尼龙网过滤细胞悬浮液，将离散的细胞和组织片段与大块的组织碎片分离。如需进一步解离，可向组织片段中加入新鲜的胶原酶。

5．通过离心HBSS清洗细胞悬浮液数次。

6．用培养基重悬细胞。计算细胞个数，然后接种细胞进行培养。

分散酶

1．用灭菌的*或剪刀将组织切成3-4mm大小碎块。用不含钙镁离子的*清洗组织碎块数次。

2．加入分散酶（0.6-2.4单位/ml分散酶不含钙镁的*）。

3．在37℃下孵育20分钟至数小时。

4．用灭菌的不锈钢网或尼友网过滤细胞悬浮液，将离散的细胞和组织片段与大块的组织碎片分离。如需进一步解离，可向组织片段中加入新鲜分散酶。

5．通过离心*清洗细胞悬浮液数次。

6．用培养基重悬细胞。计算细胞个数，然后接种细胞进行培养。

*

1．先去除无关组织，然后用灭菌的*或剪刀将组织切成3-4mm大小碎块。通过在不含钙镁的*进行重悬来清洗组织碎块。待组织碎块沉降后去掉上清液。重复清洗2-3次。

2．将装有组织碎块的容器置于冰上，去掉所有上清液。在不含钙镁的*中加入0.25%*（每100mg组织大约需要1ml *）。

3．在4℃ 下孵育6-18小时，使低活性的*尽量渗入组织。

4．缓慢倒掉*。在37℃ 下将残余的*与组织碎块共同孵育20-30分钟。

5．向组织碎块加入温热的*培养基，并轻轻地吹吸以分散组织。如果使用无血清培养基。还应加入大豆*抑制剂。

6． 用灭菌的不锈钢网（100-200μm）过滤细胞悬浮液，直至所有组织*散开。计算细胞个数，然后接种细胞进行培养。