1 资料和方法

1.1 观察对象

    随机选取初诊为喉癌的患者36例，组织病理学证实均为鳞状上皮癌，其中高分化2例，低分化29例;男30例，女6例，平均年龄(60.0±8.1)岁。取活检前全部病例均未接受任何治疗。按照抗癌协会TNM分期的方案，36例中Ⅰ期6例，Ⅱ期15例，Ⅲ期9例，Ⅳ期6例。

1.2 免疫组化染色

    取喉部肿瘤活检标本，分为2份，其中1份送组织病理学检查证实喉癌的诊断，另1份作免疫组织化学检测(下称免疫组化)。采用肾癌组织为阳性对照标本。将组织作厚度为5 μm的切片，经脱蜡等常规处理后，其中1张切片做HE染色，另1张做免疫组化用。简单的免疫组化的操作步骤如下：对切片加入1%H2O2甲醇溶液，抑制内源性过氧化物酶;在磷酸缓冲液( PBS)中洗5 min，共3次;滴加3%的非免疫马血清，在37℃保温20 min，阻断非特异性免疫结合反应;在PBS中洗涤，方法同前;滴加抗PCNA或survivin单克隆抗体(Santa Cruz产品)，稀释度为1∶50 溶液，37℃温育60 min后放在4℃冰箱中过夜;次日按前法用PBS 洗涤，再滴加*化羊抗鼠IgG单克隆抗体(北京中山生物技术有限公司产品，1∶50 稀释)，在37℃中保温40 min;按前法PBS洗涤后滴加ABC复合物(北京中山生物技术有限公司产品，1∶50稀释)，37℃保温40 min;按前法用PBS洗涤，滴加新鲜配制的酶底物二氨基联苯二胺盐酸盐显色，zui后用苏木素轻度复染。阳性对照标本，按上述步骤染色。阴性对照标本除以PBS代替*抗体外，其它步骤与被测标本相同。

    结果判断：光镜下观察到细胞核或胞浆内出现红棕色颗粒为阳性(PCNA在胞核，survivin在胞浆和胞核)，不染色为阴性。在切片四角和*各选一高倍视野，各计数200个细胞。阳性细胞数≥10%者界定为阳性病例，阳性细胞数<10%者为界定阴性病例。

1.3 化学治疗

    *20～25 mg/m2，静脉滴注，每天1次，共3 d;甲酰四氢*钙100 mg，静脉滴注，每天1次，共5 d;5氟*500～750 mg/m2，静脉滴注，每天1次，共5 d;*8 mg溶于20 mL生理盐水内，静脉推注，每天1次，共4 d。每月循环1次，共3个月。

    患者的*疗效按RECIST[2]评价标准。*缓解(CR)：所有目标病灶消失，无新病灶出现，肿瘤标记下降至正常，并维持4周;部分缓解(PR)：所有(一个或多个)基线目标病灶zui长径总和减少≥30%，并维持4周;疾病稳定(SD)：所有基线目标病灶zui长径总和缩小但未达PR，或增大但未达PD;疾病进展(PD)：较已记录到得zui小目标zui长径总和增大≥20%，或出现一个或多个新病灶。本研究将CR及PR视为对*敏感，SD及PD视为对*不敏感。

1.4 统计学处理

采用确切概率法。

2 结果

2.1 *效果

    36例喉癌，经*、5氟*和*联合*方案治疗后，对*敏感者有24例，占66.6%;对*不敏感者有12例，占33.3%。抗体

2.2 PCNA在喉癌中的表达及其与喉癌组织*敏感性的关系

    PCNA阳性表达信号位于细胞核，36例喉癌中，阳性表达者20例，占55.6%;阴性表达者16例，占44.4%。PCNA阳性组的*敏感性(90.0%)明显高于PCNA阴性组(37.5%)(P<0.01)，见表1。

2.3 survivin在喉癌中的表达及其与喉癌组织*敏感性的关系

survivin阳性表达信号位于细胞浆和细胞核，36例喉癌中，阳性表达者23例，占63.8%;阴性表达者13例，占36.2%。survivin阳性组的*敏感性(90.0%)与survivin阴性组的敏感性差异无统计学意义(65.2% vs 69.2%, P>0.05)，见表2。表1 喉癌组织PCNA阳性组与阴性组对*敏感性的比较表2 喉癌组织survivin阳性组与阴性组对*敏感性的比较 例(%)两组比较：P=1.000(确切概率法)。

3 讨论

    *在恶性肿瘤的治疗中具有重要作用。*效果取决于肿瘤细胞对抗癌药物的敏感性。导致*失败的原因很复杂，存在着多种机制，例如肿瘤多药耐药性(MDR)是肿瘤细胞对抗癌药物表现出耐药性的作用机制之一，某些影响细胞的生长繁殖、凋亡的基因分子也影响肿瘤细胞对抗癌药物的敏感性。

    PCNA是一种分子质量为36 000非组蛋白细胞核多肽，是DNA复制时聚合酶6的辅助成分，在细胞增殖中起着重要作用，其表达在G1期开始增高，s期达到高峰，G2期和M期明显下降。肿瘤细胞中PCNA含量反映了肿瘤增生能力的高低。有研究发现，晚期卵巢癌、腺癌、软组织肉瘤、骨肿瘤及宫颈癌等中的高PCNA表达病例的*效果较好，因而提出肿瘤细胞的PCNA表达水平可以预测某些肿瘤对*的敏感性[3]。survivin作为凋亡抑制蛋白家族(IAPs)中结构*的新成员，其分子量zui小，但具有强大抗凋亡作用。survivin特异性表达于胚胎和胎儿组织及绝大多数肿瘤组织，但在终末分化的成人组织(除胸腺、生殖腺外)中不表达。多方面的研究提示，它与肿瘤的发生密切相关，且其表达往往与肿瘤的恶性程度、预后不良呈正向关系。反义survivin核酸降低survivin表达后，增强胃癌细胞对*药物*的敏感性[4]。PCNA和survivin的异常表达在喉癌的发生发展过程中起着重要作用，并且与喉癌的组织分化程度、临床分型、淋巴结转移密切相关，可作为喉癌的病理诊断及判断预后的参考指标[5]。

    PCNA和survivin的异常表达可作为喉癌的病理诊断及判断预后的参考指标，那么，能否作为*敏感性的指标呢?在本实验中，我们发现PCNA表达阳性的喉癌组织对*敏感性明显高于PCNA阴性组(90.0% vs 37.5%, P<0.01), 说明PCNA在喉癌中表达可以增强肿瘤对*的敏感性。而survivin阳性病例与survivin阴性病例相比较, 喉癌对*的敏感性差异无统计学意义(P>0.05)，说明survivin的表达对喉癌*敏感性的影响不大。我们的研究结果提示, PCNA高表达可作为预测喉癌对*敏感的指标之一，而survivin的异常表达似不宜作为预测喉癌对*敏感的指标。但由于本实验所研究的病例数尚较少，需要增加病例做进一步研究。 抗体