1. dcfh-da可稀释于培养基或缓冲液中。血清或培养基颜色并不影响dcfh-da及细胞内荧光产生，但可能会影响荧光显微镜观察，干扰荧光分光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪荧光测定。可将dcfh-da稀释于无酚红培养基或适宜的缓冲液如pbs中。这依赖于使用何种荧光设备进行测定。

    2. 加入dcfh-da的时机或孵育时间，以zui终能顺利检测细胞内活性氧为目的。药物处理时间较短(<2小时)或预计ros效应较弱，可先加或同时加入dcfh-da。反之，treat 刺激时间较长(>6 小时)或预计产生ros效应较强，可后加dcfh-da。ELISA试剂盒

     3. 活性氧供体含高纯度12 mm h2o2。加入细胞后其本身即是一种活性氧，而且在代谢过程中可产生其它类型的活性氧，均可使dcfh-da氧化为dcf呈现强绿色荧光。因而，用户可使用该试剂作为测试实验系统或仪器的阳性试剂，以初步观察细胞活性氧所产生的荧光的一般特征，并且也可以将该实际作为实验的一个阳性对照。推荐该试剂的细胞工作浓度为20~100 μm或更低浓度，但超过200μm将产生细胞毒。如果用户熟悉ros荧光或实验没有必要采用阳性对照，可以不加该试剂。ELISA试剂盒