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小鼠脾脏DC的分离方法

时间:2015-10-19阅读:2972
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    小鼠脾脏DC是研究zui多的淋巴组织DC,其特征为组成性表达MHC-II类分子和CD11c。该细胞群可进一步分为三群:主要分布于边缘区的CD4+CD8-CD11b+DC,主要分布于T细胞区的CD4-CD8+CD11b-DC和双阴性DC----CD4-CD8+CD11b+。其中,CD8+DC表达CD1d和DEC-205。我们可以根据需要选择不同的方法将脾脏DC分选出来。

(一)贴壁法

    小鼠脾脏DC在体外可黏附于玻璃或塑料表面,但培养18-24h后,其黏附能力丧失,借此可与巨噬细胞分离。该方法无需特殊试剂,不需要进行密度梯度离心,操作简单、省时。但用此方法获取的DC数量少,纯度低,而且分离所得的DC处于不同的分化阶段,无法满足精细实验的需要。

(二)磁珠分选法

    CD11c表达于所有已知小鼠DC表面,所以将包被了磁珠的CD11c抗体与小鼠淋巴组织或非淋巴组织悬液共孵育并置于磁场后,结合了CD11c抗体的细胞将留在分选柱中,脱离磁场后可分离得到CD11c阳性的DC。该方法简单易行,若操作得当,细胞纯度可以达到95%以上。但需购置相应分选设备及试剂,花费较高。

(三)流式细胞仪分选

    DC表面表达多种相对特异性的表面标志,可根据实验需要,选用某些特定表面标志的单克隆荧光抗体作标记,明确目的细胞群,通过流式细胞仪做自动分选。

    该方法可以根据多个标记进行细胞分选,弥补了MACS分选的不足,而且分离得到的DC细胞纯度更高。但是采用FCM分选目前存在的主要问题是DC的种类很多,发育的过程和表面特征标志目前尚未*清楚。因此,在做DC分离时,必须视标本来源及目的细胞选择合适的单克隆抗体精选标记。另外,进行流式分选必须购置具有分选功能的流式细胞仪,价格昂贵,对操作人员的技术也有较高要求。

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