大鼠雄烯二酮（ASD）elisa试剂盒说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围： 96T
0.5nmol/L- 16nmol/L
使用目的：
本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中雄烯二酮（ASD）含量。
实验原理
    大鼠雄烯二酮（ASD）Elisa试剂盒说明书本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠雄烯二酮（ASD）水平。用纯化的大鼠雄烯二酮（ASD）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入雄烯二酮（ASD），再与HRP 标记的雄烯二酮（ASD）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的雄烯二酮（ASD）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光
度（OD 值），通过标准曲线计算样品中大鼠雄烯二酮（ASD）浓度。
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。Elisa试剂盒
2．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，
然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽
量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此
重复5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
10 分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止
液后15 分钟以内进行。Elisa试剂盒