详细介绍*分散技术提取方法

*是广泛应用的消化剂。*是一种胰脏制品，对蛋白质有水介作用，主要作用于赖氨酸或*相连接的肽键，使细胞间质中的蛋白质水介而使细胞分散开，在常用的蛋白酶中由于产品的活力和纯度不同，对细胞的消化能力也不同，*对细胞的作用，取决于细胞类型、酶的活力、配制的浓度、消化的温度、无机盐离子、pH以及消化时间的长短等。

1.细胞类型 *适于消化细胞间质较少的软组织,能有效地分离肝、肾、甲状腺、羊膜、胚胎组织、上皮组织等。而对含结缔组织较丰富的组织,如 乳腺、滑膜、子宫、纤维肉瘤、肿瘤组织等就无效，但若与胶原酶合用,就能增加其对组织的分离作用。

2.酶的活力 市售的*,其活力都经过测定而有效，但配制时必须新鲜，需保存在低温冰箱中，消化时的pH和温度都要适宜，否则会影响活力，细胞的分散直接与酶的活力有关，zui终使用活力为1:200或1:250，56℃pH8.0时活力zui强。

3.酶的浓度 *一般采用的浓度为0.1%-0.25%（活力1:200或1:250）,但遇到难消化的组织时，浓度可适当提高，消化时间适当延长。浓度高对细胞有毒性，而较低浓度的*在培养液中可促进细胞的增殖，若培养液中加入血清，其少量*可被血清中抗*因子所清除。

4.温度 一般认为*在56℃时活性zui强，但由于对细胞有损害而不能被采用，常使用的温度为37℃，通常在37℃进行消化比室温作用快。

5.pH pH8~pH9是*活力适宜范围，但随碱性的增加其活力也随之减少，活性强分散快，细胞也容易被消化下来，消化分离细胞时PH只能选用7.6～8.0之间，否则对细胞有损伤。

6.无机盐离子 若用含有钙和镁的盐类溶液来配制*时，可以发生抑制胰蛋白的消化作用。因此,在配制时应采用无钙镁离子的PBS配制。

7.消化时间 如果细胞消化时间过长，可以损害细胞的呼吸酶，从而影响细胞的代谢，一般消化时间为20分钟为宜，冷消化时使用低浓度消化液，于4℃过ye也可。

分离方法如下：

8.过ye冷消化 将取得的组织用Hanks液洗三次，剪成碎块大小为4毫米左右，用Hanks液洗2~3次以除去血球和脂肪组织，再加入0.25%的*，摇匀后放4℃过ye，次日再用Hanks液洗涤，弃去上清，共洗2~3次，然后，加入少量营养液吹打分散，细胞计数，按适当的浓度分瓶培养。

②多次提取消化法 多次提取消化法有以下几种：

热消化多次提取 将剪碎的细胞块加入0.25%*37℃水浴中消化15~20分钟，然后经洗涤后用营养液分散制成细胞悬液，按合适的浓度分瓶培养，然后将留下的未*消化的组织按上述方法操作，再消化提取细胞。

冷消化多次提取 方法同上，只是消化温度为4℃。

先热消化后冷消化 将组织块先用*于37℃下消化20分钟经洗涤后用营养液分散，制成悬液，剩余未消化的小组织块经洗涤后用*于4℃下过ye，次日再提取细胞，分散成悬液，分瓶培养。

该酶为粉剂，保藏时要防潮，室内温度不宜过高，保存时间不能太长，若粉剂结团块,说明该部分受潮或失效。