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培养细胞遗传学的检测技术

阅读:187发布时间:2016-1-11

    细胞培养是体外研究细胞生物学性状、遗传学及分子生物学特性zui直接有效的手段。培养细胞遗传学的主要检测技术,包括性染色体的检测、染色体显示、染色体显带及染色体基因定位等。对培养细胞的分子生物学检测主要包括细胞DNA检测、RNA检测及蛋白质的检测,而相关的生物学检测主要包括细胞酶学检测及细胞凋亡的检测。

    组织培养细胞是研究细胞遗传zui便利、zui有效的方法和对象;也是揭示培养细胞性状的重要方面。*具有46条染色体数就是用细胞培养法所确定出来的。当前已发展出染色体分带、姊妹染色单体分化染色、染色体原位杂交等多种技术。近年染色体荧光基因标记法又获得迅速发展,使基因作为实体得以在染色体上显现,从而*了染色体和分子遗传学之间的空白。染色体的研究已成为组织培养技术中重要组成部分。

一、性染色体检测

(一)原理

   在间期细胞核中,女性x染色质和男性Y染色质均可用特殊染色法显示出来。女性的两个x染色体中的一个,在间期时的染色质呈异固缩(heteropycnosis),呈深染的小体称Barr氏体(图9—1)。Barr氏体位于问期细胞核内面,呈三角形或半月形小体,易为碳酸复荭等染料着色。正常女性Barr氏体阳性,男性为阴性。男性Y染色质位于间期细胞核近*部,易为盐酸阿的平着色,荧光显微镜下观察发较强荧光,呈点状小体,发光部分系Y姿色体异固缩的长臂。初代培养细胞和二倍体细胞株均可观察到性染色质,传代细胞系表现不规律。

(二)方法

1.碳酸复红(basic fuchsin)显示x染色质法

(1)材料:盖玻片培养的细胞。

(2)染色液

储存液:称碱性复红3g,溶于1OOml 70%乙醇中,可长期保存。

工作液:(现用现配)

储存液               10.0ml

5%石炭酸水溶液      90.0ml

冰醋酸               10.0 ml 

甲醛(40%)           10.0ml

(3)染色步骤

1)细胞:盖玻片培养细胞用37℃的BSS漂洗后,立即投入染色液内染色5~lOmin(亦可先固定再染色);如用涂片标本则应待涂片干后,迅速投入96%酒精固定10~15min后再染色。

2)分化:用96%酒精分化lmin,分化时要不断摇动,把片子上多余的染料漂洗掉。

3)脱水:通过纯酒精lmin。

4)封片:二甲苯透明2~3min,树胶封固。

(4)结果:细胞质不着色,细胞核染成紫红色;阳性Barr氏体附于细胞核膜内面呈三角或半月形小体。

2.荧光染色显不Y染色质法

(1)材料:盖玻片培养的细胞。

(2)染色液

PBS(pH5.5~6.6)    100.0ml

盐酸阿的平(atebrine)   0.2g

(3)染色步骤:Y染色质显示染色与染色体荧光显带法相同。

(4)结果:在荧光显微镜下观察,Y染色质呈特别明亮黄绿色荧光圆点,直径0.25~ 0.3μm,可位于核内任何位置,但以近*时居多。

 


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