抗血清纯化的目的是尽量除去抗血清中与目的抗体不相关的成分，以防止抗体外的其他血清成分对试验结果产生影响。因此只能根据不同目的的要求，从抗血清中除去容易干扰的有关成分，或提取相应的免疫球蛋白。
江苏菲亚生物的科研人员通过不断的实验研究总结出抗血清纯化的方法主要有粗提法和精制法两个过程。粗提法主要常用硫酸铵盐析法，精制法分非特异性和特异性两种类型。非特异性方法如葡聚糖凝胶过滤法、离子交换层析法，其方法均系基于蛋白质分子的物理性质。特异性方法如免疫吸附法，其方法基于抗原抗体的特异性反应。
一、盐析法
蛋白质在不同浓度的盐溶液中相对溶解度不同，血清γ球蛋白在一定浓度盐溶液中易于沉淀，而白蛋白则不易沉淀，据此可将二者分离。
?主要试剂与器材
1.饱和硫酸铵溶液 取500ml蒸馏水加热至70～80℃，将400g硫酸铵溶于其中，搅拌20min，冷却。待硫酸铵结晶沉于瓶底，其上清即为饱和硫酸铵。在使用前用28%氨水调pH7.0。
2.兔血清(含抗体)。
3.透析袋、离心机等。
?操作方法
用55%饱和硫酸铵提取血清中β、γ球蛋白
⑴血清1份加生理盐水1份混匀,然后逐滴加入饱和硫酸铵2份中,边加边搅拌,防止形成团块降低沉淀物的特异性.混匀后静置30min或置4℃冰箱过夜。
⑵低温高速10 000/min离心10min，将上清液(含白蛋白)弃去，取沉淀物(含球蛋白)溶于少量生理盐水中。
用33%饱和硫酸铵提取γ球蛋白
将上述提取物生理盐水溶液2份加1份饱和硫酸铵。然后再10 000/min离心，其余操作同上。
3.按同样方法用33%饱和硫酸铵再提取1次。
4.将提取物装入透析袋，在生理盐水中透析，以除去其中所含的硫酸铵。放-20℃冰箱保存。
?结果判断
用双向免疫扩散法和免疫电泳法检测抗体活性、效价和纯度。
二、凝胶过滤法
?实验原理
利用具有分子筛效应的多孔网状凝胶做为介质，可分离提纯分子量不同的大分子物质。在凝胶过滤过程中，分子量大的物质因不能进入凝胶网孔而沿凝胶颗粒间空隙先流出凝胶柱外；分子量小的物质因能进入凝胶网孔而受阻滞，流速缓慢而zui后流出柱外，这样就能将分子量不同的物质分离。
?主要试剂与器材
1.待提纯样品。
2.Sephadex G-200。
3.2.5×100mm层析柱。
4.洗脱液 0.01mol/L pH7.2～7.4PBS(含0.14mol/L NaCl)。
5.751紫外分光光度计。
?操作方法
1.处理凝胶 将Sephadex G-200用蒸馏水竟充分膨胀后进行浮选。
2.装柱 在层析柱底部铺加一层尼龙纱，然后将洗脱液和凝胶粒子沿插入柱底的玻璃棒缓缓倾注于层析柱内。
3.加样 在凝胶柱表面再加一层尼龙纱，沿管壁缓缓加入样品，所加样品体积不超过凝胶柱的10%。
4.洗脱 洗脱液洗脱，流速20ml/h。待样品洗脱下来(用20%磺基水杨酸检测)即用试管分段收集。
5.检测 在紫外分光光度计上测定各管样品的A280nm值。
?结果判断
以A280nm值为纵轴，收集管次序为横轴，绘出各洗脱峰，并分别收集各峰的洗脱液，再分别进行蛋白质定量与性质和纯度的鉴定。用已知标准抗体，采用双向琼脂扩散试验、免疫电泳法鉴定蛋白质性质和纯度。
三、离子交换层析法
?实验原理
离子交换层析是从血清包括抗血清中分离纯化IgG的重要方法。它是利用带电离子的纤维素(如DEAE纤维素)，吸附带相反电荷的蛋白质，又因各种蛋白质的等电点不尽相同，在一定pH条件下，所带电荷量不等，与纤维素结合的能力有别。当用pH7.4磷酸缓冲液(PB)洗脱时，人血清蛋白中IgG所带电荷zui少，与纤维素结合zui差，故zui先被洗脱下来，从而可达到分离纯化目的。
?主要试剂与器材
1.蒸馏水、0.5mol/L NaOH、0.01mol/L pH7.4 PBS、20%三氯醋酸。
2.混合正常人血清、DEAE纤维素。
3.层析柱、烧杯、pH试纸。
?操作方法
1.用蒸馏水浸泡适量DEAE纤维素过夜，除去飘浮物，再用0.5mol/L NaOH浸泡30min，反复用蒸馏水洗，可用2 000r/min离心或布氏漏斗抽滤分离，直到洗至约pH7.4，用0.01mol/L pH7.4 PBS再洗一次后装柱。
2.用相同的PBS平衡至pH7.4，当柱上端的PB液凹面与纤维素相切时，加入一定量的血清，待血清渗入柱内与柱面相切时，立即沿管壁加少量洗脱液至形成1cm液层后，用0.01mol/L PBS洗脱，控制流速为1ml/min。
3.分管收集,每管吸取少量洗脱液，加20%三氯醋酸测蛋白，合并、保留蛋白含量较高的洗脱液。
4.将含IgG的洗脱液装入透析袋内，用蔗糖或大分子聚乙二醇包埋过夜，水份析出，袋内IgG被浓缩。IgG可短期保存于4℃冰箱中备用。
?结果判断
用单向免疫扩散试验测定浓缩液IgG含量，用抗人全血清作免疫电泳测定纯度，如纯化成功，应只在IgG部位出现沉淀线。
为了提高实验的准确性,江苏晶美的科研人员将坚持不懈地努力,为广大实验研究人员提供更好的实验方法,更好的血清产品。
