游离胆固醇含量测定试剂盒说明书

50 管/48 样
择 注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
FC 是构成细胞膜的主要成分，也是合成肾上腺皮质激素、性激素、胆汁酸及维生素 D 等生
理活性物质的重要原料。FC 浓度可作为脂代谢的指标。
测定原理：
FC 氧化酶催化 FC 生成△4-胆甾烯酮和 H 2 O 2 ，过氧化物酶催化 H 2 O 2 、4-氨基安替比林和酚
生成红色醌类化合物，在 500nm 有吸收峰，其颜色深浅与 FC 含量成正比。
自备仪器和用品：
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1mL 玻璃比色皿、异丙醇和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：异丙醇 50mL（自备）；
工作液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存；
标准品：液体 1mL×1 支，浓度为 0.5 μ mol/mL，4℃保存。
FC 的提取：
1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，
加入 1mL 试剂一）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（10 4 个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建
议 500 万细胞加入 1mL 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 2 秒，间隔 3
秒，总时间 3min）；然后 8000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。
3．血清（浆）样品：直接测定。
测定操作：
1. 分光光度计预热 30 min，调节波长到 500 nm，蒸馏水调零。
2. FC 工作液在 40℃水浴中预热 30min。
3. 标准管：依次在 1mL 玻璃比色皿中加入 250μL FC 标准液和 750μL FC 工作液，混匀，静
置 24h 后于 500nm 测定 A 标准管。
4. 测定管：依次在 1mL 玻璃比色皿中加入 250μL FC 待测液和 750μL FC 工作液，混匀，静
置 24h 后于 500nm 测定 A 测定管。
注意：标准管只需测定一次。
计算公式：
1. 血清（浆）中 FC 含量计算：
FC 含量（μmol /dL）= C 标准液×A 测定管÷A 标准管×100mL
=50×A 测定管÷A 标准管
C 标准液：0.5μmol/mL；100 mL：1dL=100 mL。
2. 组织中 FC 含量计算：
(1)按样本蛋白浓度计算
FC 含量（μmol / mg prot）= C 标准液×A 测定管÷A 标准管÷Cpr
= 0.5×A 测定管÷A 标准管÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
FC 含量（μmol / g 鲜重）= C 标准液×A 测定管÷A 标准管÷W
= 0.5×A 测定管÷A 标准管÷W
C 标准液：0.5μmol/mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g/mL
3. 细胞、细菌中 FC 含量计算：
FC 含量（μmol /10 4 cell）= C 标准液×A 测定管÷A 标准管÷细菌或细胞（10 4 cell /L）
=0.5×A 测定管÷A 标准管÷细菌或细胞（10 4 cell /L）
C 标准液：0.5μmol/mL。