一步法RT-PCR和两步法RT-PCR对马铃薯病毒诊断研究的比较
为建立快速、简便、灵敏度高、特异性强的RT-PCR检测马铃薯 病毒技术,采用试剂盒和Total试剂2种方法,从马铃薯叶片和茎秆中提取马铃薯x病毒、马铃薯Y病毒、马铃薯S病毒、马铃薯A病毒以及马铃薯卷叶病毒的 RNA.设计了5种马铃薯病毒引物,同时应用一步法RT-PCR和两步法RT-PCR的反应体系对5种病毒扩增,分别得到620 bp(PVX)、550 bp(PVY)、435 bp(PVS)、300 bp(PVA)和222 bp(PLRV)的扩增片段.将结果与报道的这5种马铃薯病毒核苷酸序列进行BLAST比对,表明扩增的5种马铃薯病毒靶带的序列与靶序列*一致.2种 诊断方法对马铃薯病毒核酸进行浓度检测,结果证明,两步法RT-PCR具有较高灵敏性.但这2种方法均可快速、简便、有效地诊断马铃薯病毒.
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