组织裂解成细胞的方法和步骤

组织裂解步骤：
方法一：
1.  称新鲜冰冻组织。切成1-3 mm3小块。
2.  转移组织到50ML试管里。加入10 ml of 1X PBS.
3.  加甲醛至终浓度为1%。室温下转动15—20mins。
4.  加2.5 M Glycine至终浓度为0.125 M(终止交联)。4°C下转动10mins。
5.  100 g, 4°C 离心样本5mins。
6.  弃上清，取沉淀。用45 ml 冰冻 1X PBS和25 ml 冰冻1X PBS各洗一次。离心弃上清。
7.  再加入2 ml 冰冻1X PBS。匀浆机裂解组织。
8.  1000 rpm，4°C ，离心5 min。弃上清。加入1x PBS（300mg/ml），分装成1ml每管（可做10次ChiP）。离心去上清。
9.  1 ml冰冻Buffer I重悬细胞。离心取沉淀。
10.  1 ml冰冻Buffer II重悬细胞。离心取沉淀。
11.  0.5 ml裂解缓冲液重悬细胞。（此时样本可以进行超声裂解）

方法二：
1.  称新鲜冰冻组织。切成1-3 mm3小块。
2.  转移组织到50ML试管里。加入10 ml of 1X PBS.
3.  加甲醛至终浓度为1%。室温下转动15—20mins。
4.  加2.5 M Glycine至终浓度为0.125 M(终止交联)。4°C下转动10mins。
5.  100 g, 4°C 离心样本5mins。
6.  弃上清，取沉淀。用45 ml 冰冻 1X PBS和25 ml 冰冻1X PBS各洗一次。离 心弃上清。
7.  再加入2 ml 冰冻1X PBS。匀浆机裂解组织。1000 rpm，4°C ，离心5 min。弃上清。
8.  细胞裂解液重悬细胞。加入蛋白酶抑制剂PMSF (10 ul per ml), aprotinin (1 ul per ml) and leupeptin (1 ul per ml). 冰上孵育10-15mins
9.  5,000 rpm ，4°C离心5分钟。取沉淀
10.  细胞核裂解液重悬细胞加入（8）中的蛋白酶抑制剂。冰上孵育10-20mins。
11.  接下来就进去超声过程了。