WIL2S细胞,人B淋巴细胞必须生活在等渗环境中，大多数培养细胞对渗透压有一定耐受性。人血浆渗透压290mOsm/kg, 可视为培养人体细胞的理想渗透压。鼠细胞渗透压在320mOsm/kg左右。对于大多数哺乳动物细胞，渗透压在260－320mOsm/kg的范围都适宜。

产品名称：WIL2S细胞,人B淋巴细胞

培养条件：DMEM+15％FBS+1％P/S

库存状态：现货供应

2-3代培养好的：款到后需要培养7-15个工作日

P1代干冰运输：款到后需要准备三天左右

细胞培养室有24h的空气消毒装置，但我们还是做的很细，水盘里加的是灭菌水，每次开相时都时酒精擦手。当然，进室之前洗手是肯定的。每星期消毒水擦遍每一个角落。我们一直很安全。现在我已经在里面做了5、6次原代取材，也没污染过。总之，细胞培养是个很细致的事，时时小心，问题应该不大。

实验步骤贴壁细胞：

1.收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度至1000-10000孔，（边缘孔用无菌PBS填充）。

2.5%CO2，37℃孵育，至细胞单层铺满孔底（96孔平底板）,加入浓度梯度的药物,原则上，细胞贴壁后即可加药，或两小时，或半天时间，但我们常在前一天下午铺板，次日上午加药.一般5-7个梯度,每孔100ul,设3-5个复孔.建议设5个，否则难以反应真实情况

3.5%CO2，37℃孵育16-48小时，倒置显微镜下观察。

4.每孔加入20ulMTT溶液（5mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4h。若药物与MTT能够反应，可先离心后弃去培养液，小心用PBS冲2-3遍后，再加入含MTT的培养液。

5.终止培养，小心吸去孔内培养液。

6.每孔加入150ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。

7.同时设置调零孔（培养基、MTT、二甲基亚砜），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜）。

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