TSCCA细胞,人舌鳞癌细胞系 必须生活在等渗环境中,大多数培养细胞对渗透压有一定耐受性。人血浆渗透压290mOsm/kg, 可视为培养人体细胞的理想渗透压。鼠细胞渗透压在320mOsm/kg左右。对于大多数哺乳动物细胞,渗透压在260-320mOsm/kg的范围都适宜。
产品名称:TSCCA细胞,人舌鳞癌细胞系
培养条件:DMEM+15%FBS+1%P/S
库存状态:现货供应
2-3代培养好的:款到后需要培养7-15个工作日
P1代干冰运输:款到后需要准备三天左右
细胞培养室有24h的空气消毒装置,但我们还是做的很细,水盘里加的是灭菌水,每次开相时都时酒精擦手。当然,进室之前洗手是肯定的。每星期消毒水擦遍每一个角落。我们一直很安全。现在我已经在里面做了5、6次原代取材,也没污染过。总之,细胞培养是个很细致的事,时时小心,问题应该不大。
实验步骤贴壁细胞:
1.收集对数期细胞,调整细胞悬液浓度,每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度至1000-10000孔,(边缘孔用无菌PBS填充)。
2.5%CO2,37℃孵育,至细胞单层铺满孔底(96孔平底板),加入浓度梯度的药物,原则上,细胞贴壁后即可加药,或两小时,或半天时间,但我们常在前一天下午铺板,次日上午加药.一般5-7个梯度,每孔100ul,设3-5个复孔.建议设5个,否则难以反应真实情况
3.5%CO2,37℃孵育16-48小时,倒置显微镜下观察。
4. 每孔加入20ulMTT溶液(5mg/ml,即0.5%MTT),继续培养4h。若药物与MTT能够反应,可先离心后弃去培养液,小心用PBS冲2-3遍后,再加入含MTT的培养液。
5.终止培养,小心吸去孔内培养液。
6.每孔加入150ul二甲基亚砜,置摇床上低速振荡10min,使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。
7.同时设置调零孔(培养基、MTT、二甲基亚砜),对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜)。
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