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ELISA直接法

阅读：518发布时间：2015-12-16

ELISA直接法实验步骤：

一、包被抗原

1) 用 PBS 或碳酸盐缓冲液稀释抗原至终浓度 20 μg/ml。用移液器吸取 50 μl 稀释抗原到 PVC 酶标板上，按要求往后进行系列稀释。

2) 酶标板上覆盖封口膜，室温孵育 2 小时，或者 4 °C 过夜。孵育时间需要优化。

3) 倒掉孵育溶液，用 PBS 洗板 2 次，每孔 200 μl。在水池上轻甩倒掉洗液，在纸巾上轻拍酶标板除去残留液体。

二、封闭

1) 用含 5% 脱脂奶粉或含 5% 血清的 PBS 缓冲液封闭酶标板上剩余的蛋白结合位点，每孔 200 μl。或者用其他封闭剂如 Block ACE、BSA（牛血清蛋白）代替。

2) 封口膜覆盖酶标板室温至少孵育 2 小时，或者 4 °C 过夜。

3) PBS 洗板 2 次。

三、加抗体孵育

1) 加入抗体，每孔 100 μl，稀释到zui合适的浓度（参照厂家推荐），使用前用封闭液现配。

2) 封口膜覆盖酶标板室温孵育 2 小时，孵育时间需要进行优化。通常 2 小时孵育即可获得足够强的信号，但如果获得的信号较弱时，可4 °C 孵育过夜获得较强信号。

3) PBS 洗板 4 次

四、检测

1) 用多通道吸液器加入底物，每孔 100 μl（或 50 μl）。

2) 显示出足够深的颜色后，加终止液（如有必要），每孔 100 μl。


商铺：https://www.hbzhan.com/st161127/

主营产品：elisa试剂盒，细胞株，抗体，生物试剂


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