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上海极威生物为大家介绍elisa样本的处理方法

阅读:174发布时间:2017-6-6

ELISA实验是实验室zui常见的实验方法之一,可用于elisa测定的标本十分广泛,包括体液(如血清、血浆)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液)、细胞培养上清、细胞、组织匀浆等均可作标本以测定其中某种成份。有些标本可直接进行测定,有些则需经预处理。下面我们来详细介绍一下各种样本具体的处理方法及保存:

ELISA常见样本之:血清样本:

室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000/分)。收集上清。如有沉淀形成,应再次离心。

Elisa常见样本之:血浆样本:

根据试剂盒的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,加入10%(v/v)抗凝剂(0.1M柠檬酸钠或1%heparin2.0%EDTA.Na2)混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。如有沉淀形成,应再次离心。

Elisa常见样本之:尿液、胸腹水、脑脊液:

用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。如有沉淀形成,应再次离心。

Elisa常见样本之:细胞培养上清:

检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBSPH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

Elisa常见样本之:细胞样本:

检测细胞的成份时,对于贴壁细胞,去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。加入适量裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞10秒后,细胞就会被裂解。对于悬浮细胞,离心收集细胞,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍.加入适量裂解液,用枪吹打把细胞吹散。用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装然后再裂解。充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续操作。

Elisa常见样本之:组织标本:

切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS或组织蛋白萃取试剂,缓冲液中可加入蛋白酶抑制剂。用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清置于-20度或-70度保存,如有必要,可以将样品浓缩干燥。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

以上为elisa实验中常见样本的处理方法详细介绍,其他样本处理方法可上海极威生物科技有限公司。


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