一、试剂配制

1.  STE（25%蔗糖  10 mmol/L Tris-HCl pH 8.5 1 mmol/L EDTA）

 蔗糖       250 g

1 mol/L Tris.HCL   10 ml

0.5 mol/L EDTA     2 ml，加水至1 000 ml

115℃，20 min高压灭菌

2.  1mol/L  MgCl2

取  MgCl2  203.30 g，加水至1 000 ml

3.  Tris-HCL  pH8.5

取Tris  121.14 g

用HCL调pH至8.5，加水至1 000 ml

（12 mol/L  HCL约30 ml）

4.  0.5 mol/L EDTA pH8.5

乙二氨四乙酸二钠      186.12 g

NaOH  20 g，加水至1 000 ml

121℃，20 min高压灭菌

二、操作步骤

1.  称取菌体重量，按5~10 ml/g菌体加入STE溶液，搅拌至菌体*悬浮。

2.  按0.5~1 mg/g菌体加入用STE溶液新鲜配制的*溶液，用玻璃棒用力搅匀后于4℃环境中放置20 min。此时菌液呈粘稠状。

3.  按10 mg/g菌体加入用STE溶液新鲜配制的脱氧胆酸钠（DOC）溶液，用力搅匀。

4.  加入5~10 ml 1 mol/L MgCl2溶液，搅匀后加入约40 μl Dnase I（25 mg/ml）充分搅拌至菌液变稀。

5.  15 000 rpm，4℃离心30 min。

6.  取离心上清，量取其体积，测定蛋白质浓度，倒入置于冰浴的烧杯中，边搅拌边缓慢加入固体硫酸铵使其达到50%饱和度。待固体硫酸铵安全溶解后，静置于0℃环境中30 min。

7.  离心，15 000 rpm，4℃，30 min。取离心上清，量其体积，测定蛋白浓度。

8.  将离心上清装入透析袋，4℃搅拌在pH8.5 20 mmol/L Tris-Hcl，1 mmol/L EDTA溶液中透析。

加入硫酸铵不论是固体硫酸铵，还是加入饱和硫酸铵溶液，加入时应边加入边搅拌，特别注意① 加入硫酸铵要慢，因为太快会引起蛋白质发生共沉淀，加入固体硫酸铵时事先要将硫酸铵研磨成粉末，加入饱和硫酸铵溶液时要一滴一滴地加入；② 搅拌要慢，搅拌剧烈，蛋白质溶液容易起泡沫，由于表面张力效应会引起蛋白质变性。