上海雅吉生物科技有限公司

免疫电泳实验步骤

时间:2016-3-28阅读:420
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免疫电泳实验步骤
1. 抗体琼脂板的制备
 
将融化的琼脂冷却到55 ℃,加入适量(看免疫血清的效价高低而定)的抗体,立即混匀(不要出现泡沫),将上述的抗体琼脂(大约20 ml)制成琼脂板,冷却后按下图打孔备用。
 
 
2. 加样
 
在各孔里加入按二倍连续稀释法稀释的抗原。
 
3. 电泳
 
通电后调电压为10 V/cm,或电流强度为2~4 mA/cm,时间约1~5小时。
 
4. 观察
 
在电场作用下,定量的抗原在含有定量的琼脂中泳动后,比例合适时,可在短时间内出现锥形沉淀,此沉淀线形似火箭,抗原浓度越高,“火箭”面积愈大。但抗体效价要高。
 
5. 定量抗原
 
在电泳一定时间后可以观察到火箭状的白色沉淀峰。电泳完毕后,测定沉淀峰的高度,用圆规仔细测量沉淀峰zui与样品孔中心间的距离,记录结果。以标准样品即不同抗原浓度为横坐标,以沉淀峰的高度为纵坐标绘制标准曲线。根据量得的待测抗原沉淀峰的长度,从标准曲线查出相应抗体含量,在乘以样品稀释倍数即可计算出该抗原的含量。免疫电泳实验步骤

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