制备酵母蔗糖酶实验步骤，1.  提取

（1）准备一个冰浴, 将研钵稳妥地放入冰浴中。

（2）称取10 g 湿啤酒酵母, 和适量（ 约5 g） 二氧化硅一起放入研钵中。二氧化硅要预先研细。

（3）缓慢加入预冷的30 ml 去离子水, 每次加2 ml 左右, 边加边研磨, 至少用30 分钟。至酵母细胞大部分研碎, 以便将蔗糖酶充分转入水相。

（4）（可选项） 研磨时用显微镜检查研磨的效果。

（5）将混合物转入两个离心管中, 平衡后, 用高速冷冻离心机离心, 4 ℃ , 10 000 r/ min , 离心15 min。

（6）用滴管小心地取出水相, 转入另一个清洁的离心管中,4 ℃ , 10 000 r/ min , 离心15 min。

（7）将上清液转入量筒, 量出体积。用广泛pH 试纸检查上清液pH, 用1 mol/ L 乙酸将pH 调至5 . 0 , 称为“ 级分I”。留出1.5 ml 测定酶活力及蛋白含量, 剩余部分转入清洁离心管中。

2.  热处理和乙醇沉淀

（1）预先将恒温水浴调到50 ℃ , 将盛有级分Ⅰ 的离心管稳妥地放入水浴中, 50 ℃下保温30 分钟, 在保温过程中不断轻摇离心管。

（2）取出离心管, 于冰浴中迅速冷却, 4 ℃ , 10 000 r/ min ,离心10 min。

（3）将上清液转入小烧杯中, 放入冰盐浴（ 没有水的碎冰撒入少量食盐） , 缓慢地加入等体积预冷至- 20 ℃的95%乙醇, 同时轻轻搅拌, 再在冰盐浴中放置10 分钟, 以沉淀*。于4 ℃ ,10 000 r/ min , 离心10 min , 倾去上清液, 并滴干, 沉淀保存于离心管中, 盖上盖子或薄膜封口, 然后将其放入冰箱中冷冻保存（称为“级分Ⅱ”）。

废弃上清液之前, 要用*检查其酶活性（ 与下一个实验一起做）。制备酵母蔗糖酶实验步骤，