人8羟基脱氧鸟苷elisa试剂盒工作原理

人8羟基脱氧鸟苷elisa试剂盒工作原理
本试剂盒采用的是双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定样品中人8羟基脱氧鸟苷(8-OHDG)的水平。向预先包被了人8羟基脱氧鸟苷(8-OHDG)单克隆抗体的酶标孔中加入8羟基脱氧鸟苷(8-OHDG)，温育；温育后，加入标记的抗8-OHDG抗体，再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅与样品中人8羟基脱氧鸟苷(8-OHDG)的浓度呈正相关。
注意事项
从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。
为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。
不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。
洗板方法
手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。 
人8羟基脱氧鸟苷elisa试剂盒标本要求
1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
操作程序
标准品的稀释：（本试剂盒提供原倍标准品一支，用户请按照说明自行在小试管中倍比稀释）：
64ng/ml
（5号标准品）
120μl的原倍标准品加入120μl的标准品稀释液
32ng/ml
（4号标准品）
120μl的5号标准品加入120μl的标准品稀释液
16ng/ml
（3号标准品）
120μl的4号标准品加入120μl的标准品稀释液
8ng/ml
（2号标准品）
120μl的3号标准品加入120μl的标准品稀释液
4ng/ml
（1号标准品）
120μl的2号标准品加入120μl的标准品稀释液
根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
加样：1）空白孔：空白对照孔不加样品，标记的抗8-OHDG抗体，链霉亲和素-HRP，只加显色剂A&B和终止液，其余各步操作相同；2）标准品孔：加入标准品50μl，-HRP50μl（标准品中已事先整合好抗体，故不加）；3)待测样品孔:加入样本40μl，然后各加入抗- 8-OHDG抗体10μl、链酶亲和素-HRP50μl，盖上封板膜，轻轻振荡混匀，37℃温育60分钟。
配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟。
终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后10分钟以内进行。
9.根据人8羟基脱氧鸟苷elisa试剂盒标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。